發(fā)布時(shí)間：2020-02-28所屬分類：醫(yī)學(xué)職稱論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要背景：脂肪干細(xì)胞的提取及純化流程尚未建立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。最常用的純化脂肪干細(xì)胞的方法是利用紅細(xì)胞裂解液處理基質(zhì)血管成分。但這一步驟是否對(duì)脂肪干細(xì)胞存在不良影響仍缺乏證據(jù)，是否有利于未來(lái)臨床應(yīng)用仍有待探討。目的：比較氯化銨紅細(xì)胞裂解液法和非裂
摘要背景：脂肪干細(xì)胞的提取及純化流程尚未建立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。最常用的純化脂肪干細(xì)胞的方法是利用紅細(xì)胞裂解液處理基質(zhì)血管成分。但這一步驟是否對(duì)脂肪干細(xì)胞存在不良影響仍缺乏證據(jù)，是否有利于未來(lái)臨床應(yīng)用仍有待探討。目的：比較氯化銨紅細(xì)胞裂解液法和非裂解法提取脂肪干細(xì)胞的效率，并進(jìn)一步比較兩種方法提取脂肪干細(xì)胞的生物學(xué)特性。方法：收集吸脂手術(shù)患者脂肪組織，經(jīng)Ⅰ型膠原酶消化后，利用或不用氯化銨紅細(xì)胞裂解液對(duì)基質(zhì)血管成分進(jìn)行純化，MuseTM細(xì)胞狀態(tài)分析儀對(duì)活細(xì)胞計(jì)數(shù)及活細(xì)胞比例評(píng)估;將基質(zhì)血管成分接種后培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞至第2代，光學(xué)顯微鏡觀察脂肪干細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞學(xué)分析脂肪干細(xì)胞表型，CCK-8法繪制細(xì)胞增殖曲線，成脂及成骨培養(yǎng)基誘導(dǎo)后油紅O及茜素紅染色法分別評(píng)估成脂、成骨分化能力。該實(shí)驗(yàn)經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并與患者簽署相關(guān)知情同意書。結(jié)果與結(jié)論：①與裂解組相比，非裂解組提取即刻的基質(zhì)血管成分中非紅活細(xì)胞數(shù)更多，活細(xì)胞百分比更大;②兩組脂肪干細(xì)胞均呈梭形、魚(yú)群狀排列;③兩組細(xì)胞均高表達(dá)CD90、CD73、CD105等細(xì)胞表面抗原，低表達(dá)或不表達(dá)CD11b、CD34、CD19、CD45、HLA-DR等細(xì)胞表面抗原;④非裂解組細(xì)胞增殖速度更快，成脂及成骨能力兩組間無(wú)明顯區(qū)別;⑤結(jié)果表明，利用氯化銨紅細(xì)胞裂解液法提取基質(zhì)血管成分降低了脂肪干細(xì)胞提取效率，抑制了脂肪干細(xì)胞增殖能力。非裂解過(guò)程不影響脂肪干細(xì)胞表型及成脂、成骨分化能力。因此不建議在人脂肪干細(xì)胞提取過(guò)程中進(jìn)行氯化銨法紅細(xì)胞裂解。
關(guān)鍵詞：紅細(xì)胞裂解液;細(xì)胞提取;脂肪干細(xì)胞;細(xì)胞活性;細(xì)胞表型;細(xì)胞增殖
0引言Introduction脂肪干細(xì)胞是一群從脂肪組織中獲取的中胚層來(lái)源的多能成體干細(xì)胞，具有自我更新及多向分化潛能[1]，其獲取方法微創(chuàng)，組織來(lái)源豐富，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值[2-3]。然而，目前體外擴(kuò)增脂肪干細(xì)胞的方法還有待標(biāo)準(zhǔn)化，如培養(yǎng)基使用種類、細(xì)胞接種密度等[4]，這成為學(xué)者們不斷研究的方向[5]。
相關(guān)期刊推薦：《中國(guó)組織工程研究》雜于1997年創(chuàng)辦，發(fā)表組織工程研究中關(guān)于干細(xì)胞培養(yǎng)與移植、組織構(gòu)建、材料生物相容性評(píng)價(jià)(天然或合成材料與納米粒子、人工材料植入體、植入器官及外源性細(xì)胞)、計(jì)算機(jī)輔助骨外科技術(shù)的應(yīng)用基礎(chǔ)及臨床研究，轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和循證醫(yī)學(xué)研究的文章，發(fā)表中國(guó)組織工程研究領(lǐng)域一流水平的學(xué)術(shù)、技術(shù)創(chuàng)新成果。
目前在提取脂肪干細(xì)胞的過(guò)程中多包含紅細(xì)胞裂解步驟[1，6-7]，其目的是純化細(xì)胞組分，便于原代脂肪干細(xì)胞提取。含有氯化銨的紅細(xì)胞裂解液可能具有潛在毒性，目前尚無(wú)臨床級(jí)的脂肪干細(xì)胞裂解液[8]。紅細(xì)胞裂解過(guò)程是否影響脂肪干細(xì)胞活力、表型、增殖及分化能力，目前相關(guān)研究較少。該研究旨在探討利用紅細(xì)胞裂解液提取脂肪干細(xì)胞是否為必要步驟，以優(yōu)化人脂肪干細(xì)胞提取過(guò)程。
1材料和方法Materialsandmethods
1.1設(shè)計(jì)細(xì)胞生物學(xué)對(duì)比觀察。
1.2時(shí)間及地點(diǎn)2018年2月至2019年5月在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院研究中心完成。
1.3材料
1.3.1脂肪組織實(shí)驗(yàn)所用脂肪組織取自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院行吸脂手術(shù)的9名患者，均為女性，年齡25-39歲，中位年齡32歲，體質(zhì)量指數(shù)18.59-24.98kg/m2，見(jiàn)表1。無(wú)全身代謝及內(nèi)分泌疾病，無(wú)腫瘤病史及腫瘤家族史，無(wú)酗酒及吸煙史，無(wú)服用利尿劑等影響糖類脂類代謝藥物史。實(shí)驗(yàn)經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并與患者簽署相關(guān)知情同意書。
1.3.2實(shí)驗(yàn)試劑及儀器胎牛血清(Gibco公司);Ⅰ型膠原酶(Sigma公司);青鏈霉素、DMEM低糖培養(yǎng)基(Hyclone公司);紅細(xì)胞裂解液、HumanMSCAnalysisKit(BD公司);MuseTMcellanalyzer(Millipore公司);流式細(xì)胞儀(BD公司);CCK-8(碧云天公司);人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基、人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(Cyagen公司);倒置相差顯微鏡(Olympus公司);酶標(biāo)儀(EnSpire公司)。
1.4實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1分離細(xì)胞基質(zhì)成分無(wú)菌條件下獲取脂肪抽吸物，每例吸脂脂肪標(biāo)本均在獲取后12h內(nèi)進(jìn)行基質(zhì)血管成分的提取操作。將人脂肪抽吸物用DPBS清洗，1000r/min離心5min后去除上層油層及下層液體層，留取中間脂肪層，記錄剩余脂肪組織的體積。將每例脂肪樣本均分2份，每份20mL，于終質(zhì)量濃度為0.01g/L的Ⅰ型膠原酶中37℃搖床(100r/min)消化1h，加入含體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清、1%青鏈霉素的DMEM低糖培養(yǎng)基以中和膠原酶的作用，1200r/min離心10min，棄上清。非裂解組加入20mL低糖DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，渦旋均勻后室溫放置15min，100目濾網(wǎng)過(guò)濾，加入20mL低糖DMEM培養(yǎng)基1000r/min離心5min，棄上清，該步驟重復(fù)2次后加入低糖DMEM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞制備細(xì)胞懸液。裂解組采用20mL1×紅細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞沉淀，渦旋均勻后室溫放置15min，此后步驟同非裂解組。采用MuseTM細(xì)胞狀態(tài)分析儀計(jì)數(shù)懸液中活細(xì)胞百分比及活細(xì)胞數(shù)。將細(xì)胞懸液分裝入75cm2培養(yǎng)瓶，于37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO2條件下培養(yǎng)。待細(xì)胞80%融合后，TrypLETMExpress進(jìn)行消化，以1∶2比例傳代。來(lái)自不同供體的第2代細(xì)胞進(jìn)行各項(xiàng)分析。
1.4.2基質(zhì)血管成分細(xì)胞計(jì)數(shù)及活細(xì)胞百分比測(cè)定提取即刻基質(zhì)血管成分細(xì)胞懸液，利用MuseTM計(jì)數(shù)和活力試劑盒分析活死細(xì)胞。簡(jiǎn)言之，取20μL細(xì)胞懸液，加于380μLMuseTM細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測(cè)試劑，吹打均勻，室溫避光放置5min。設(shè)置儀器稀釋系數(shù)為1∶20，用MuseTM細(xì)胞狀態(tài)分析儀對(duì)基質(zhì)血管成分細(xì)胞懸液中活細(xì)胞數(shù)及活細(xì)胞百分比進(jìn)行檢測(cè)。
1.4.3細(xì)胞表型檢測(cè)利用人間充質(zhì)干細(xì)胞表型檢測(cè)試劑盒對(duì)以下表面標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)：CD90、CD44、CD105、CD73、CD11b、CD34、CD19、CD45、HLA-DR。利用人間充質(zhì)干細(xì)胞表型檢測(cè)試劑盒對(duì)如上標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)。取第2代脂肪干細(xì)胞，消化后制成單細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞濃度為1×106L-1。取1mL單細(xì)胞懸液置于1.5mLEP管中，1000r/min離心5min，棄上清后加入100μLDPBS緩慢吹打、重懸細(xì)胞，按照說(shuō)明書在不同的EP管加入鼠抗人抗體，4℃避光孵育30min，1000r/min離心5min后棄上清，DPBS沖洗并再次離心后吸凈上清，用500μLDPBS重懸細(xì)胞，加入40g/L多聚甲醛溶液固定細(xì)胞。使用BD流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表型，F(xiàn)lowJo軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
1.4.4CCK-8法繪制細(xì)胞增殖曲線取第2代脂肪干細(xì)胞，消化后制成單細(xì)胞懸液，以每孔2000個(gè)細(xì)胞密度接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加入100μL細(xì)胞懸液。依據(jù)培養(yǎng)時(shí)間設(shè)24個(gè)復(fù)孔，另外再設(shè)置8個(gè)空白調(diào)零孔(無(wú)細(xì)胞，只加入等量完全培養(yǎng)基)，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)培養(yǎng)。配置CCK-8、培養(yǎng)基混合液，體積比為1∶10，分別于第0-7天輕輕吸取設(shè)定孔內(nèi)上清液100μL，向孔內(nèi)加入CCK-8、培養(yǎng)基混合液110μL，輕柔水平振蕩混勻，放入培養(yǎng)箱孵育4h。用酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)450nm處各孔吸光度，復(fù)孔讀數(shù)(平均值)與調(diào)零孔讀數(shù)(平均值)的差值即為最終吸光度值;根據(jù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的最終吸光度值繪制細(xì)胞增殖曲線。
1.4.5脂肪干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)及油紅O染色第2代脂肪干細(xì)胞消化重懸后計(jì)數(shù)，以2×104個(gè)/cm2細(xì)胞密度接種于6孔板，每孔加入2mL細(xì)胞懸液。當(dāng)細(xì)胞匯合達(dá)到80%時(shí)，開(kāi)始更換成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基。根據(jù)賽業(yè)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成脂誘導(dǎo)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行成脂誘導(dǎo)，持續(xù)誘導(dǎo)9d，進(jìn)行油紅O染色：吸去培養(yǎng)皿中成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基，DPBS輕輕漂洗2次，40g/L多聚甲醛室溫固定30min;吸除多聚甲醛，DPBS漂洗3次，每孔加入油紅O工作液1mL，37℃孵育30min;吸除油紅O工作液，DPBS漂洗2次，在相差倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察和圖像采集。Imagepro軟件分析成脂水平。
1.4.6脂肪干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)及茜素紅染色第2代脂肪干細(xì)胞消化重懸后計(jì)數(shù)，以2×104個(gè)/cm2細(xì)胞密度接種于6孔板，每孔加入2mL細(xì)胞懸液。當(dāng)細(xì)胞匯合達(dá)到80%時(shí)，開(kāi)始更換成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基。根據(jù)賽業(yè)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行成骨誘導(dǎo)，每隔3d換液1次，持續(xù)誘導(dǎo)14d，進(jìn)行茜素紅染色：吸去培養(yǎng)皿中成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，DPBS輕輕漂洗2次，40g/L多聚甲醛室溫固定30min;吸除多聚甲醛，DPBS漂洗3次，每孔加入1mL茜素紅染液，37℃孵育5min，吸除茜素紅染液，DPBS漂洗2次，在相差倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察和圖像采集。Imagepro軟件分析成骨水平。
1.5主要觀察指標(biāo)①基質(zhì)血管成分中活細(xì)胞濃度及百分比;②脂肪干細(xì)胞表型;③脂肪干細(xì)胞增殖能力;④脂肪干細(xì)胞成脂、成骨分化能力。
1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS23.0及GraphPadPrism8醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x_±s表示，進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性意義。
2結(jié)果Results
2.1非裂解組提取即刻活細(xì)胞數(shù)及活細(xì)胞比率優(yōu)于裂解組為了驗(yàn)證MuseTM細(xì)胞狀態(tài)分析儀是否可以排除非裂解組基質(zhì)血管成分中的紅細(xì)胞，將裂解組的細(xì)胞門應(yīng)用于非裂解組進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，即獲得非裂解組的非紅細(xì)胞活細(xì)胞數(shù);重新上樣后重新對(duì)非裂解組設(shè)門，再次進(jìn)行非裂解組的細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力分析;將兩個(gè)門獲得的活細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較。經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，兩組活細(xì)胞數(shù)：應(yīng)用非裂解組門計(jì)數(shù)得到細(xì)胞濃度為(4.25±2.55)×109L-1，應(yīng)用裂解組門計(jì)數(shù)得到細(xì)胞濃度為(4.17±2.52)×109L-1，P=0.921，差異無(wú)顯著性意義，即提示MuseTM細(xì)胞狀態(tài)分析儀可對(duì)非裂解組細(xì)胞進(jìn)行非紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，見(jiàn)表2。進(jìn)一步比較非裂解組與裂解組提取即刻細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，非裂解組細(xì)胞數(shù)量為(5.59±2.47)×109L-1，裂解組細(xì)胞數(shù)量為(1.86±1.01)×109L-1，差異有顯著性意義(P=0.001)，非裂解組基質(zhì)血管成分提取即刻活細(xì)胞數(shù)更多，見(jiàn)表2。非裂解組細(xì)胞活力百分比為(65.91±3.47)%，裂解組細(xì)胞活力百分比為(60.20±5.13)%，差異有顯著性意義(P=0.019)，見(jiàn)表2及圖1。
2.2原代培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)原代細(xì)胞為梭形，可見(jiàn)混雜非梭形貼壁細(xì)胞，見(jiàn)圖2A。第2代脂肪干細(xì)胞幾乎完全呈長(zhǎng)梭形生長(zhǎng)，呈魚(yú)群狀排列，見(jiàn)圖2B。
2.3第2代脂肪干細(xì)胞表型根據(jù)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果，CD90、CD73、CD105等細(xì)胞表面抗原標(biāo)記物呈現(xiàn)高表達(dá)，CD11b、CD34、CD19、CD45、HLA-DR等細(xì)胞表面抗原標(biāo)記物呈現(xiàn)低表達(dá)或無(wú)表達(dá)，兩組細(xì)胞間表面抗原比例差異無(wú)顯著性意義，見(jiàn)圖3。
2.4兩組脂肪干細(xì)胞的增殖能力裂解組與非裂解組第2代人脂肪干細(xì)胞的增殖曲線均為近弧形,形態(tài)近似度高;接種后第7天，非裂解組吸光度值為0.70±0.19，裂解組吸光度值為0.66±0.19，兩組差異有顯著性意義(P=0.03)，見(jiàn)表2及圖4。
2.5兩組脂肪干細(xì)胞體外成脂分化能力相似將裂解組與非裂解組第2代人脂肪干細(xì)胞在體外進(jìn)行成脂誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)第9天進(jìn)行油紅O染色。非裂解組樣本彌散分布的紅色油滴更為明顯，染色結(jié)果行Imagepro半定量檢測(cè)(累積光密度值)：非裂解組為11350.00±3776.32;裂解組為11912.17±3324.47，差異無(wú)顯著性意義(P=0.79)，見(jiàn)表2及圖5。
2.6兩組脂肪干細(xì)胞體外成骨分化能力相似將裂解組與非裂解組第2代人脂肪干細(xì)胞在體外進(jìn)行成骨誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)第14天進(jìn)行茜素紅染色，兩組均可見(jiàn)彌散分布的紅色結(jié)節(jié)。染色結(jié)果行Imagepro半定量檢測(cè)(累積光密度值)：非裂解組為2846018.4±1993818.0，裂解組為2568546.0±2866366.2，差異無(wú)顯著性意義(P=0.86)，見(jiàn)表2及圖6。
3討論Discussion
脂肪干細(xì)胞由于產(chǎn)量高、容易獲取，是代替骨髓干細(xì)胞的重要干細(xì)胞來(lái)源[8]。人脂肪干細(xì)胞治療慢性潰瘍等已在許多臨床研究中報(bào)道[9-10]，此外其具有治療糖尿病、心血管疾病、瘢痕的潛能[11-13]。目前提取脂肪干細(xì)胞的過(guò)程主要步驟分為脂肪處理、膠原酶消化、終止消化、紅細(xì)胞裂解等步驟[6]。為了使人脂肪干細(xì)胞能夠進(jìn)行臨床應(yīng)用，在整個(gè)分離、擴(kuò)增和移植過(guò)程中應(yīng)遵循良好生產(chǎn)規(guī)范(GMP)指導(dǎo)原則[14]
裂解紅細(xì)胞的主要目的是純化混雜的基質(zhì)血管成分細(xì)胞團(tuán)，去除其中的紅細(xì)胞，以便于細(xì)胞貼壁后獲得相對(duì)同質(zhì)的細(xì)胞群[15]。在細(xì)胞提取過(guò)程中常用含有氯化銨成分的紅細(xì)胞裂解液[16-18]，其作用機(jī)制為紅細(xì)胞內(nèi)有大量的碳酸酐酶，可以自發(fā)將NH3轉(zhuǎn)化為NH4+，CO2轉(zhuǎn)化為HCO3-，促使胞外NH3和CO2連續(xù)內(nèi)流而造成細(xì)胞裂解[15]。然而，目前尚無(wú)臨床級(jí)的紅細(xì)胞裂解液，此外脂肪組織內(nèi)并無(wú)大量血液成分。因而紅細(xì)胞裂解步驟是否必要、無(wú)裂解步驟是否影響脂肪干細(xì)胞生物學(xué)特性仍有待探討。
該研究發(fā)現(xiàn)，提取基質(zhì)血管成分即刻非裂解組活細(xì)胞數(shù)及活細(xì)胞比例優(yōu)于裂解組，提示裂解液成分可能對(duì)有核細(xì)胞的活性存在不良影響，從而導(dǎo)致了裂解組活細(xì)胞數(shù)及比例均較非裂解組低;CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示第2代細(xì)胞接種7d后，裂解組細(xì)胞增殖能力顯著低于非裂解組，提示對(duì)于氯化銨裂解處理存活下來(lái)的脂肪干細(xì)胞，到第2代其生長(zhǎng)增殖能力仍然受到不可逆影響。氨的神經(jīng)毒性已經(jīng)被廣泛研究，被認(rèn)為是肝性腦病的最關(guān)鍵原因，其毒性作用包括直接毒性、氧化應(yīng)激、谷氨酰胺水平變化導(dǎo)致能量代謝障礙等[19]。WANG等[20]在體外應(yīng)用氯化銨處理模擬高氨血癥培養(yǎng)肝細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)氯化銨抑制肝細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、造成線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mPTP)長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)放引起線粒體腫脹損傷，并影響細(xì)胞三羧酸循環(huán)能量代謝造成ATP產(chǎn)生降低等，表明其對(duì)肝細(xì)胞亦存在細(xì)胞毒性。LI等[21]分別應(yīng)用155mmol/L氯化銨及0.3%低滲氯化鈉提取出的第4代人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)155mmol/L氯化銨裂解組提取出的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖能力明顯低于0.3%低滲氯化鈉。盡管不同細(xì)胞品系對(duì)氯化銨毒性反應(yīng)有所不同[22]，通過(guò)該研究初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有理由推測(cè)氯化銨裂解步驟可能通過(guò)同樣機(jī)制影響脂肪干細(xì)胞的活性及增殖能力，確切的機(jī)制有待進(jìn)行深入研究。
該研究還發(fā)現(xiàn)脂肪干細(xì)胞表型和分化能力在裂解組和非裂解組中并無(wú)差異，這與LI等[21]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。學(xué)者們對(duì)裂解法提取骨髓或臍血來(lái)源干細(xì)胞進(jìn)行了諸多研究，多不影響細(xì)胞表型。研究表明，紅細(xì)胞裂解法制備骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞不影響細(xì)胞表型及成脂成骨分化能力，且較密度離心法更易于標(biāo)準(zhǔn)化[15]。最近有作者分析了滲透篩選是否可用于從臍血中提取人間充質(zhì)干細(xì)胞，結(jié)果證明了間充質(zhì)干細(xì)胞可用此方法進(jìn)行篩選而不影響細(xì)胞表型[23]。此外，在脂肪干細(xì)胞成脂及成骨分化方面，裂解組雖然顯示了較低的分化水平，但兩組之間差異無(wú)顯著性意義，作者推測(cè)短時(shí)間內(nèi)裂解液對(duì)細(xì)胞膜的影響尚未引起分化相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)，其機(jī)制仍有待于進(jìn)一步探討。
該研究比較了氯化銨紅細(xì)胞裂解液法和非裂解法提取的脂肪干細(xì)胞的生物學(xué)特性的差異，并提供了令人信服的證據(jù)說(shuō)明后者可能是一種更有效的方法，其可以更有效地獲取人脂肪干細(xì)胞，更好地保留細(xì)胞增殖能力，并不影響細(xì)胞表型及細(xì)胞成脂、成骨分化能力。目前，非裂解法獲取人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞更有利于臨床應(yīng)用，對(duì)細(xì)胞活力及增殖能力影響更低的新型紅細(xì)胞裂解液有待研發(fā)。
