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摘 要： 摘要：唾液酸是一類攜帶負電荷的九碳單糖，在體內廣泛分布。唾液酸具有多種多樣的生物學功能，而腫瘤細胞表面唾液酸異常高表達能夠保護腫瘤細胞免受免疫系統的識別和攻擊。其作用機理主要是通過干擾機體免疫系統中的免疫細胞與免疫分子，抑制一系列抗腫瘤免
摘要：唾液酸是一類攜帶負電荷的九碳單糖，在體內廣泛分布。唾液酸具有多種多樣的生物學功能，而腫瘤細胞表面唾液酸異常高表達能夠保護腫瘤細胞免受免疫系統的識別和攻擊。其作用機理主要是通過干擾機體免疫系統中的免疫細胞與免疫分子，抑制一系列抗腫瘤免疫應答的發生，如抑制補體系統的活化，阻礙抗原提呈細胞的激活，削弱免疫效應細胞的殺傷作用和促進免疫抑制性細胞因子的分泌等，進而介導腫瘤免疫逃逸。本綜述主要闡述的是唾液酸的結構和生物學功能以及其在腫瘤免疫逃逸中的作用及機制。
關鍵詞：唾液酸;免疫逃逸;免疫細胞;免疫分子;免疫治療
近年來，對腫瘤的發生、發展以及腫瘤免疫逃逸機制的研究不斷深入，其中免疫逃逸對于腫瘤細胞的存活至關重要。唾液酸是一類攜帶負電荷的九碳單糖，具有強大的免疫調節能力。研究腫瘤細胞表面唾液酸的高表達會削弱免疫系統的監視和攻擊能力，進而介導腫瘤免疫逃逸。本文將重點闡述唾液酸的結構和生物學功能及其在腫瘤免疫逃逸中的作用，以期為腫瘤的防治提供更多理論依據。
1 唾液酸的概述
1.1 唾液酸的結構與分類
唾液酸是一類攜帶負電荷的九碳單糖，以糖甙的形式存在于糖蛋白和糖脂的糖鏈末端[1]。它的核心結構有四種(如圖1[2])：神經氨酸(Neu)、N-乙酰神經氨酸(Neu5Ac)、N-羥乙酰神經氨酸(Neu- 5Gc)和酮基-脫氧壬酮糖酸(Kdn)，其中，Neu5Ac 是哺乳動物中最常見的唾液酸衍生物[3]。唾液酸修飾是指唾液酸在唾液酰基轉移酶的作用下將唾液酸供體CMP-Neu5Ac的唾液酸基連接于糖蛋白、糖脂的末端，是糖基化修飾的主要形式之一[4]。研究表明，唾液酸轉移酶的表達程度與腫瘤發生發展有著緊密的聯系，它可以通過影響細胞膜表面糖復合物的唾液酸化數量或結構而發揮作用，唾液酰基轉移酶(sialyltransferase, ST)ST3Gal-I、ST- 3Gal-III、ST6Gal-I等多種唾液酰基轉移酶的過表達已被證實與腫瘤的侵襲和預后相關[5-7]。
1.2 唾液酸的生物學活性
唾液酸具有多種多樣的生物學功能，如細胞表面糖復合物末端的唾液酸能夠介導細胞之間信息的傳遞，還可以作為被識別的受體與許多配體 (如選凝素、凝集素、細胞黏附蛋白分子等)結合，主要參與細胞間的黏附過程。此外，糖復合物末端唾液酸能夠屏蔽糖蛋白和糖脂的結構，抑制細胞或分子與其特異性識別位點的結合，進而躲避免疫系統的監視，促進免疫逃逸的發生[8-10]。已有研究表明，腫瘤細胞惡性程度與其表面唾液酸含量密切相關：腫瘤細胞表面的唾液酸含量越高，腫瘤細胞的轉移性越強。據相關文獻報道，血清中的唾液酸已經可以作為一種廣泛有效的腫瘤標志物[11]。
2 腫瘤免疫逃逸的主要機制
2.1 腫瘤細胞與腫瘤免疫逃逸
腫瘤細胞和免疫系統之間的相互作用能夠影響腫瘤的發生與發展。腫瘤細胞可通過異常表達腫瘤細胞表面抗原，改變腫瘤細胞表面的分子結構和分泌免疫抑制因子等一系列措施抑制機體免疫系統對腫瘤細胞的識別和攻擊，從而促進腫瘤免疫逃逸的發生。據文獻報道，腫瘤細胞表面唾液酸異常高表達會抑制免疫系統對腫瘤細胞的監視和攻擊進而介導免疫逃逸的發生[12]。
2.2 機體免疫系統與腫瘤免疫逃逸
免疫系統是機體非常重要的防御系統，腫瘤的發生與否與機體免疫系統的功能密不可分，腫瘤發生的可能性會由于免疫系統功能低下或受抑制而提高。腫瘤微環境是指腫瘤細胞生活及其與機體免疫系統相互作用的場所，其中包括髓源抑制性細胞和腫瘤相關巨噬細胞等免疫抑制性細胞，T細胞、自然殺傷細胞(natural killer cell, NK 細胞)及樹突狀細胞等功能缺陷的免疫細胞，以及一系列免疫抑制因子[13]。免疫抑制的腫瘤微環境在一定程度上可增強腫瘤的侵襲力，進而提高腫瘤免疫逃逸發生的可能性[14]。研究表明，腫瘤細胞表面唾液酸的異常高表達會抑制相關免疫細胞和免疫分子的功能從而介導腫瘤免疫逃逸，接下來，本文將對這兩方面進行重點闡述。
3 唾液酸與腫瘤免疫逃逸
3.1 免疫細胞與唾液酸
3.1.1 樹突狀細胞
樹突狀細胞(dendritic cell, DC)是一種活躍的專職抗原提呈細胞。成熟DC誘導外源性抗原的免疫應答，可以通過提呈腫瘤抗原，高表達共刺激分子以及黏附分子從而促進T細胞介導的免疫應答，未成熟DC則誘導自身免疫耐受。因此，DC的成熟與否可以決定免疫應答的結局。據報道，腫瘤細胞表面唾液酸化結構，如黏蛋白、神經節苷脂[15]，可以抑制DC的活化與成熟，進而阻礙T細胞抗腫瘤免疫應答的發生。
黏蛋白是一類高相對分子質量糖蛋白。研究發現，高度唾液酸化的黏蛋白能夠與DC上的唾液酸結合性免疫球蛋白樣凝集素(Siglecs)結合并抑制其激活。黏蛋白1可以使未成熟DC聚集并誘導其成熟。但是，這類DC功能不全，既不能產生白細胞介素-12(interleukin-12, IL-12)，也不能激活T細胞的免疫應答。黏蛋白2與唾液酸在唾液酰基轉移酶的作用下以α-2,6糖苷鍵連接以后，可以與單核細胞源性的DC表面sigelec-3結合并誘導其凋亡;當與siglec-9結合后，會減弱IL-12的生成[16-17]。神經節苷脂是一類含有唾液酸的糖鞘脂。人腦中有9 種主要的神經節苷脂，分別為GM1a、GM2、 GM3、GM4、GD1a、GD1b、GT1a、GT1b和 GD3。在神經母細胞瘤中，腫瘤細胞表面的GD2 會抑制DC的活化，IL-12的產生以及效應T細胞的激活[18]。在黑色素瘤中，腫瘤細胞表面的GM3和 GD3也會抑制DC的活化并誘導其凋亡[19-20]。GalNAc-GD1a最初是作為腦神經節苷脂而發現的，但隨后發現抗GalNAc-GD1a的自身抗體與吉蘭-巴雷綜合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)的發生密切相關。吉蘭-巴雷綜合征是一類自身免疫性、周圍神經炎性疾病，以對稱性、弛緩性肢體癱瘓為主要臨床特點。研究表明，吉蘭-巴雷綜合征患者的血清與天然和合成的GalNAc-GD1a均有反應[21]。
綜上，我們可以發現，腫瘤細胞表面的唾液酸聚糖可通過抑制DC的活化、誘導DC的凋亡、阻礙抗腫瘤免疫應答的發生，進而促進腫瘤免疫逃逸。
3.1.2 NK細胞
自然殺傷細胞(natural killer cell, NK細胞)是固有免疫系統的重要組成成分之一，它不需特異性抗原刺激便可直接發揮殺傷效應。腫瘤細胞可以通過表達與NK細胞抑制性受體相結合的配體，或者下調與活化性受體相結合的配體的表達來抑制 NK細胞介導的腫瘤殺傷作用[22]。有關研究表明， NK細胞殺傷活性與腫瘤細胞表面唾液酸化相關。腫瘤細胞的唾液酸化不僅可以阻礙腫瘤細胞與NK 細胞之間的物理作用，而且可以遮蔽腫瘤細胞表面能夠與之結合的活化性配體。此外，腫瘤細胞表面的唾液酸化會導致腫瘤細胞和NK細胞之間的免疫突觸形成受阻，從而削弱NK細胞對腫瘤的殺傷毒性。這可能與NK細胞表面活化性受體NKG2D 不能識別腫瘤細胞表面經唾液酸修飾的活化性配體有關，亦或與細胞膜表面的唾液酸攜帶大量的負電荷相關。已有研究發現，從患有纖維肉瘤的小鼠中提取腫瘤細胞，免疫功能受損的小鼠的腫瘤細胞表面唾液酸的表達水平要低于免疫功能正常的鼠;將這些低唾液酸化的腫瘤細胞接種至免疫功能正常的鼠中會出現明顯的生長抑制。以上結果表明，唾液酸的高表達有利于腫瘤的免疫逃逸[23]。
此外，研究發現，腫瘤細胞表面的唾液酸化還可以通過觸發由Siglecs介導的免疫抑制信號來抑制NK細胞的殺傷活性。Siglec-7表達于大部分的 NK細胞表面，而腫瘤細胞表面以α-2,8糖苷鍵連接的唾液酸與NK細胞表面的Siglec-7結合后，會抑制 NK細胞的活化，從而使腫瘤細胞逃逸NK細胞介導的殺傷功能[24-25]。
3.1.3 細胞毒T淋巴細胞
細胞毒T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocytes, CTL)是一類適應性免疫細胞。該細胞主要通過釋放穿孔素,顆粒酶以及Fas/FasL介導的靶細胞凋亡兩大機制介導靶細胞死亡。腫瘤細胞表面唾液酸聚糖的異常高表達可以通過干擾CTL活化和殺傷機制來促進免疫逃逸的發生。有相關研究證實，腫瘤細胞表面的神經節糖苷(如GD1a)會抑制CTL 中胞漿顆粒的運輸和胞吐，從而抑制胞漿顆粒中的穿孔素、顆粒酶等內容物作用于靶細胞并介導靶細胞死亡[26]。此外，腫瘤細胞表面Fas的高度唾液酸化可抑制由Fas和FasL介導的腫瘤細胞凋亡的發生[27]。綜上，腫瘤細胞主要是通過其表面唾液酸聚糖的異常高表達抑制CTL的兩條殺傷途徑，進而促進腫瘤免疫逃逸的發生。
3.1.4 巨噬細胞
巨噬細胞(macrophages)是具有異質性的一群免疫細胞，對機體的免疫防御功能及對組織穩態的維護發揮著至關重要的作用。腫瘤細胞表面的唾液酸聚糖一方面會促進巨噬細胞的識別和吞噬功能，而另一方面還可誘導巨噬細胞釋放促進腫瘤細胞生長、侵襲的細胞因子，從而介導腫瘤免疫逃逸。巨噬細胞表面通常會表達SigIec-1，其結構高度保守，主要介導細胞間的黏附。Siglec-1陽性的巨噬細胞可以結合和清除含唾液酸結構的病原體[28]。此外，相關研究表明，Siglec-1陽性巨噬細胞還可以吞噬死亡的腫瘤細胞并將其抗原遞呈給CTL，從而介導抗腫瘤免疫應答的發生;而Siglec-1被阻斷，則會抑制CTL的活化和一系列的抗腫瘤免疫應答[29]。研究發現，Siglec-1陽性巨噬細胞在自身免疫性炎癥的發生中也發揮著重要的作用，如腎小球腎炎，Siglec-1陽性的巨噬細胞積聚可引起腎小球的損傷，進而出現水腫、蛋白尿、血尿、高血壓、少尿或無尿等臨床表現，糖皮質激素治療后其表達可下降。此外，關節炎、葡萄膜視網膜炎的發生也與其表達密切相關[30]。已有文獻證實，肺癌細胞表面以α-2,6糖苷鍵連接的唾液酸會促進Siglec-15陽性的單核巨噬細胞分泌免疫抑制性細胞因子TGF-β(transforming growth factor- β)。腫瘤細胞表面的唾液酸聚糖還會抑制Siglec-9 陽性的巨噬細胞TNF-α的分泌，但促進IL-10的分泌。由此可見，腫瘤細胞表面唾液酸的表達與巨噬細胞表面Siglec的表達共同決定了細胞因子的類型，進而影響腫瘤的免疫逃逸的發生發展。
3.2 免疫分子與唾液酸
作為免疫系統的重要組成部分，免疫分子在維系免疫系統的穩定中發揮重要的功能。其中，補體系統是先天免疫的重要組成成分之一，在各種激活物的作用下補體固有成分按照一定順序被活化，進而發揮其重要的生理作用[31]。H因子是補體系統中重要的調節蛋白。在脊椎動物中，宿主細胞表面的唾液酸或某些硫酸黏多糖及其他負性分子能夠被H因子上的陰離子黏附域特異性的識別。當H因子與宿主細胞表面的唾液酸結合時，機體的補體旁路激活途徑被阻滯，從而逃避補體系統激活而造成的損傷[32]。腫瘤細胞通過細胞膜表面糖復合物的唾液酸化來逃避補體系統介導的對腫瘤細胞的殺傷作用，此外，某些腫瘤細胞還能通過自身生成H因子介導補體系統的殺傷作用[33]。據報道，應用唾液酸酶去除某些腫瘤細胞表面的唾液酸能夠促進補體系統介導的細胞溶解或調理吞噬作用[34]。H因子作為一種補體調節蛋白，在補體C3b存在的條件下，能夠識別宿主細胞表面的唾液酸并加速C3b的衰變。當H因子中參與唾液酸識別的C末端結構域發生基因突變，或者在自身抗體的作用下，其可通過促進補體的過度活化進而導致非典型溶血性尿毒綜合征和年齡相關性黃斑變性等免疫相關疾病的發生[35]。
4 唾液酸與腫瘤免疫治療
腫瘤免疫治療是一種新型的治療方式，隨著對腫瘤免疫逃逸機制及免疫治療新靶點的逐步了解，腫瘤免疫治療已逐步成為腫瘤治療的重要措施。唾液酸擁有強大的免疫調節能力，腫瘤細胞表面唾液酸的高表達會削弱免疫系統的監視和攻擊能力，因此，很多研究者認為唾液酸可以作為腫瘤免疫治療的新靶點[36]。Neu5Gc發現于眾多哺乳動物中，人體內由于缺乏相應的酶而無法合成，但是可通過食物攝取進入到人體內。這種通過外源性攝入的Neu5Gc與某些腫瘤的發生相關，隨著腫瘤組織中Neu5Gc的增多，抗原表位也隨之增多。這種抗原表位具有腫瘤特異性，因此，可以作為腫瘤免疫治療的靶點。但是，還需對其安全性及有效性做進一步的研究[37-39]。隨著動物腫瘤模型和臨床試驗方面的不斷進展，抗癌疫苗以及抗體療法將會得到更深層次的探索[40-43]。
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5 結語
綜上所述，腫瘤細胞表面唾液酸的表達情況與腫瘤的發生發展聯系密切。唾液酸可以通過削弱免疫細胞功能、干擾補體系統的活化、促進免疫抑制性細胞因子的分泌等一系列措施介導腫瘤免疫逃逸的發生(圖2)。隨著糖生物學和糖化學的迅速發展，以及對腫瘤免疫逃逸機制的深入了解，腫瘤免疫療法已受到腫瘤治療領域越來越多的重視，以唾液酸為靶點開發的靶向治療藥物也有望應用于腫瘤的治療。在以后的研究過程中，值得思考的是如何能夠真正有效地抑制腫瘤細胞表面的異常唾液酸化，或者去除腫瘤細胞異常高表達的唾液酸，甚至通過激活機體免疫系統抵抗腫瘤細胞表面異常的唾液酸化。但是，由于免疫逃逸機制綜合作用的復雜性以及腫瘤的高度異質性，仍有很多困難需要解決，有待科研工作者進行更加深入的研究。
