發(fā)布時間：所屬分類：醫(yī)學(xué)論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要:目的建立聚丙烯藥用滴眼劑瓶無菌檢查方法。方法洗脫液為0.9%無菌氯化鈉溶液，取樣量參照《中國藥典》四部通則1101醫(yī)療器械，瓶身中加入標(biāo)示容量的0.9%無菌氯化鈉溶液，旋緊外蓋振搖30s，合并提取液后采用薄膜過濾法檢查;內(nèi)蓋采用直接接種法檢查。結(jié)果無
摘要:目的建立聚丙烯藥用滴眼劑瓶無菌檢查方法。方法洗脫液為0.9%無菌氯化鈉溶液，取樣量參照《中國藥典》四部通則<1101>醫(yī)療器械，瓶身中加入標(biāo)示容量的0.9%無菌氯化鈉溶液，旋緊外蓋振搖30s，合并提取液后采用薄膜過濾法檢查;內(nèi)蓋采用直接接種法檢查。結(jié)果無菌檢查前處理研究中低濃度人工污染的枯草芽胞桿菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉和白色念珠菌的回收率均符合《中國藥典》要求;方法適用性實驗中試驗菌生長均良好。結(jié)論本法取樣量和樣品前處理方法科學(xué)有效，適用于聚丙烯藥用滴眼劑瓶的無菌檢查。
關(guān)鍵詞:聚丙烯滴眼劑瓶;直接接種法;薄膜過濾法;無菌檢查
聚丙烯滴眼劑瓶是目前國內(nèi)常用的滴眼劑包裝形式[1]，這種塑料包裝材料在高溫下易變形，因此采用本材料包裝的無菌滴眼劑需采用非終端滅菌的無菌生產(chǎn)工藝進行無菌灌裝。聚丙烯滴眼劑瓶應(yīng)在無菌灌裝前進行滅菌確保其無菌。藥品包裝材料的微生物污染風(fēng)險直接影響藥品質(zhì)量[2-7]，尤其是非終端滅菌無菌制劑的藥品包裝材料，為確保此類藥品的質(zhì)量安全，必須嚴格控制包裝材料的微生物污染。2010年版《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)中滴眼劑增加了無菌檢查，滴眼劑按無菌制劑進行生產(chǎn)，但現(xiàn)行《國家藥包材標(biāo)準(zhǔn)》僅規(guī)定創(chuàng)傷或手術(shù)滴眼劑瓶進行無菌檢查，與目前相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定不符。且《國家藥包材標(biāo)準(zhǔn)》中無菌檢查僅簡單規(guī)定檢查方法，參照《中國藥典》無菌檢查法，導(dǎo)致聚丙烯滴眼劑瓶無菌檢查在實際操作中遇到如取樣量代表性等問題，且未按《中國藥典》要求進行方法適用性試驗，因此樣品前處理方法和無菌檢查方法的選擇等方面皆有待改善。由于聚丙烯滴眼劑瓶包含瓶身、外蓋及內(nèi)蓋，包裝形式相互獨立，本實驗分別以滴眼劑瓶瓶身、外蓋和內(nèi)蓋為對象進行無菌檢查方法的研究，通過取樣量、樣品前處理方法和無菌檢查方法適用性等研究，對本品的無菌檢查方法進行全面改善，提高聚丙烯滴眼劑瓶無菌檢查的操作性、適用性及使用安全性。
1材料與方法
1.1材料聚丙烯藥用滴眼劑瓶(規(guī)格:5ml，批號:171206;規(guī)格:8ml，批號:171220;規(guī)格:10ml，批號:161129)均由慈溪市觀城塑料包裝容器廠提供。
1.2儀器與試劑HTY-2000B型集菌儀(中國杭州泰林生物技術(shù)股份有限公司);FC502一次性使用集菌培養(yǎng)器(中國杭州泰林生物技術(shù)股份有限公司)。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(FTM，批號:20190110)、胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA，批號:20180623)、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA，批號:20191010)、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基(SDB，批號:20181223)和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB，批號:20190511)均由中國青島海博科技有限公司提供，以上培養(yǎng)基適用性檢查均符合中國藥典2015年版規(guī)定[8]。標(biāo)準(zhǔn)菌株和定量菌球:枯草芽胞桿菌[CMCC(B)63501]、金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸埃希菌[CMCC(F)44102]、生孢梭菌[CMCC(B)64941]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]和黑曲霉[CMCC(F)98003]由中國藥品生物制品檢定所提供。BioballMultishot550金黃色葡萄球菌、BioballMultishot550大腸埃希菌、BioballMultishot550枯草芽胞桿菌、BioballMultishot550白色假絲酵母和BioballMultishot550黑曲霉定量菌球均由法國梅里埃公司提供。
1.3方法
1.3.1菌液制備接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌至TSB中，33℃培養(yǎng)18h;接種枯草芽胞桿菌至TSA斜面，33℃培養(yǎng)18h;接種生孢梭菌至FTM中，33℃培養(yǎng)18h;接種白色念珠菌至SDB中，23℃培養(yǎng)2d;接種黑曲霉至SDA斜面，23℃培養(yǎng)7d。每種菌的新鮮培養(yǎng)物按要求稀釋制備菌懸液，分別計數(shù)，不同菌懸液每毫升含菌數(shù)均不大于100cfu。5種定量菌球均按使用說明書分別復(fù)溶至每毫升含菌約500cfu，取菌懸液各0.1ml分別計數(shù)。
1.3.2瓶身和外蓋無菌檢查前處理研究取3批已滅菌(規(guī)格:5ml、8ml和10ml)的聚丙烯藥用滴眼劑瓶，每批產(chǎn)品取25個樣品作為供試品，每種規(guī)格的供試品均進行低濃度人工污染金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、白色假絲酵母和黑曲霉。每種菌的接種同法操作5次，方法如下:將枯草芽胞桿菌定量菌球溶液0.1ml均勻滴灑至瓶內(nèi)壁，旋上外蓋置50℃烘箱晾干;將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉和白色假絲酵母的定量菌球溶液各取0.1ml分別均勻滴灑至瓶內(nèi)壁，之后輕旋上外蓋。
相關(guān)知識推薦：衛(wèi)生系統(tǒng)晉職稱論文發(fā)表指導(dǎo)
取供試品標(biāo)示容量的洗脫液(0.9%無菌氯化鈉溶液)緩慢注入已接種的樣品中，旋緊外蓋振蕩30s，將洗脫液薄膜過濾后取濾膜培養(yǎng)，作為試驗組。取未接種菌的樣品同法操作為供試品對照組。同時取上述5種菌的菌懸液各0.1ml分別計數(shù)作為菌液組。細菌接種至TSA平板于33℃培養(yǎng)3d，霉菌和酵母菌接種至SDA平板于23℃培養(yǎng)5d。
1.3.3瓶身和外蓋無菌檢查方法適用性試驗試驗組:取上述三批聚丙烯藥用滴眼劑瓶的瓶身和外蓋，每批樣品取120瓶，20瓶一組分成6組。每瓶中加入標(biāo)示容量的0.9%無菌氯化鈉溶液，旋緊外蓋振蕩30s，合并20瓶的提取液，在提取液中加入“1.3.1”項制備的菌懸液1ml。按照《中國藥典》無菌檢查方法適用性試驗要求，6組提取液分別加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲霉。將提取液薄膜過濾后再加FTM或TSB至濾筒中。將上述濾筒分別置規(guī)定溫度培養(yǎng)5d，觀察結(jié)果。對照組:另取裝有同體積培養(yǎng)基的濾筒，分別加入等量不同試驗菌。同試驗組培養(yǎng)，觀察結(jié)果。
1.3.4內(nèi)蓋無菌檢查方法適用性試驗試驗組:取上述三批聚丙烯藥用滴眼劑瓶的內(nèi)蓋，每批樣品取120個，20個一組分成6組。將20個內(nèi)蓋放入同一無菌瓶中，再加入FTM或TSB，并加入“1.3.1”項制備的菌懸液1ml。按照《中國藥典》無菌檢查方法適用性試驗要求，6組提取液分別加入金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲霉。將上述無菌瓶分別置規(guī)定溫度培養(yǎng)5d，觀察結(jié)果。對照組:另取裝有同體積培養(yǎng)基的濾筒，分別加入等量不同試驗菌。同試驗組培養(yǎng)，觀察結(jié)果。
2結(jié)果
2.1菌液計數(shù)結(jié)果取“1.3.1”項制備和稀釋的菌液，按平皿法測定菌落數(shù)，每株試驗菌平行制備2個平皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌、枯草芽胞桿菌、白色念珠菌和黑曲霉標(biāo)準(zhǔn)菌株的計數(shù)結(jié)果分別為42cfu/皿、42cfu/皿、33cfu/皿、19cfu/皿、28cfu/皿、62cfu/皿，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、白色念珠菌和黑曲霉定量菌球的計數(shù)結(jié)果分別為47cfu/皿、47cfu/皿、48cfu/皿、44cfu/皿、52cfu/皿。
2.2瓶身和外蓋無菌檢查前處理研究結(jié)果試驗組中的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、白色假絲酵母和黑曲霉5種菌在不同規(guī)格樣品中的回收率均>80%(表1)，符合《中國藥典》中“微生物回收”的要求，表明本品的無菌檢查前處理可采用“1.3.2”項前處理方法。
2.3瓶身和外蓋無菌檢查方法適用性試驗結(jié)果聚丙烯藥用滴眼劑瓶瓶身和外蓋的無菌檢查適用性試驗結(jié)果見表2。實驗組中試驗菌生長情況與對照管比較，結(jié)果均生長良好。表明本品瓶身和外蓋無菌檢查方法可以采用“1.3.2”項浸提法結(jié)合薄膜過濾法，且樣品的檢驗量在本試驗條件下無抑菌作用。
2.4內(nèi)蓋無菌檢查方法適用性試驗結(jié)果聚丙烯藥用滴眼劑瓶內(nèi)蓋的無菌檢查適用性試驗結(jié)果見表3。實驗組中試驗菌生長情況與對照管比較，結(jié)果均生長良好。表明本品內(nèi)蓋的無菌檢查方法可以采用直接接種法，且樣品的檢驗量在本試驗條件下無抑菌作用。
2.5聚丙烯藥用滴眼劑瓶的無菌檢查法根據(jù)上述試驗結(jié)果，本品的取樣量可參照《中國藥典》四部通則(1101)醫(yī)療器械，內(nèi)蓋等量直接接種于各管適量培養(yǎng)基中，瓶身加入標(biāo)示容量的0.9%無菌氯化鈉溶液，將外蓋旋緊，振搖30s，合并提取液，經(jīng)薄膜過濾法處理，照無菌檢查法(《中國藥典》四部通則1101)檢查，均應(yīng)符合規(guī)定。
3討論
2015年版《國家藥包材標(biāo)準(zhǔn)》YBB00072002-2015中聚丙烯藥用滴眼劑瓶無菌檢查的取樣量為11個，仍按照2002年-2004年頒布的藥品包裝材料標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的取樣量取樣未進行修訂。無菌檢查取樣量應(yīng)考慮產(chǎn)品污染率和無菌檢查“通過”率，現(xiàn)行《中國藥典》無菌檢查的取樣量按照上述關(guān)系確定。當(dāng)存在微生物污染時，取樣量越大，無菌檢查“通過”率就越低。鑒于取樣的代表性及科學(xué)性，本品無菌檢查的取樣量可參照《中國藥典》四部通則(1101)醫(yī)療器械，同時應(yīng)考慮滅菌劑殘留等因素可能會造成無菌檢查的假陰性，應(yīng)增加陽性對照的取樣量。由于聚丙烯藥用滴眼劑瓶批產(chǎn)量基本都在1000瓶以上，無菌檢查取樣量參照《中國藥典》四部通則(1101)醫(yī)療器械，出廠檢驗中接種每種培養(yǎng)基至少20瓶，其出廠檢驗量應(yīng)為60瓶，上市監(jiān)督檢驗量應(yīng)為30瓶。
國外藥品包裝材料的無菌檢查方法主要也是參照醫(yī)療器械實施，產(chǎn)品性狀允許的情況下，采用直接接種法，無法采用直接接種的樣品選擇浸提法結(jié)合薄膜過濾法[9-10]，國內(nèi)醫(yī)療器械的無菌檢查也參照這個原則[11-15]。由于浸提法結(jié)合薄膜過濾法存在微生物轉(zhuǎn)移損失和操作繁瑣造成假陽性的風(fēng)險，在藥品包裝材料性狀允許的情況下，無菌檢查方法應(yīng)優(yōu)先考慮直接接種法。聚丙烯藥用滴眼劑瓶的組成包含瓶身、外蓋和內(nèi)蓋，三部分包裝相對獨立。因構(gòu)造和規(guī)格等原因，瓶身并不適用于直接接種法，需采用浸提法結(jié)合薄膜過濾法，而內(nèi)蓋則可以采用直接接種法。由于聚丙烯藥用滴眼劑瓶的規(guī)格都相對較小，所以將洗脫液的量定為標(biāo)示容量。無菌檢查取樣量參照《中國藥典》醫(yī)療器械后取樣量是之前的數(shù)倍，若振搖洗脫時間仍采用現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的1min，則60個瓶子需要振搖60min。無菌檢查振搖洗脫時間較長，操作繁瑣且容易造成污染，因此將每瓶的振搖時間定為30s，并進行低濃度人工污染金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、白色念珠菌和黑曲霉5種代表性菌株的回收率的考察，5種菌分別代表革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、芽胞菌、酵母和霉菌。樣品前處理研究表明振搖時間30s時，每種菌的洗脫回收率均符合要求，因此可將洗脫液定為標(biāo)示容量以及振搖洗脫時間定為30s。本品內(nèi)蓋相對獨立，為減少滴眼劑瓶組裝操作帶來的污染風(fēng)險，采用直接接種法進行內(nèi)蓋的無菌檢查。無菌檢查方法適用性試驗結(jié)果證明本研究建立的無菌檢查方法適用于聚丙烯藥用滴眼劑瓶。——論文作者：周燕麗
