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摘 要： 目的：采用高效液相色譜法測定保胎靈片中芍藥苷的含量。方法：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱;流動相為乙腈-水(10:90);檢測波長為230nm;柱溫為40℃;流速為1.0ml·min-1。結(jié)果：芍藥苷進樣量在0.1572μg～0.7860范圍內(nèi)呈良好的線性關系，回歸方程Y=980
【摘要】 目的：采用高效液相色譜法測定保胎靈片中芍藥苷的含量。方法：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱;流動相為乙腈-水(10:90);檢測波長為230nm;柱溫為40℃;流速為1.0ml·min-1。結(jié)果：芍藥苷進樣量在0.1572μg～0.7860范圍內(nèi)呈良好的線性關系，回歸方程Y=98073.5000X-17548.2000(r=0.9998)。平均回收率為100.04%，RSD為0.7%。結(jié)論：本方法簡便、快速、靈敏、準確，可為今后修訂該制劑的質(zhì)量標準提供參考。
【關鍵詞】 保胎靈片 芍藥苷 HPLC法 含量測定
Determination of the Contene of Baotai LingTableta by HPLC
【Abstract Objective】To establish a HPLC method for determination of the content for Paeoniflorin of Baotai Ling Tableta. Method: A Kromasil C18 column(250mm×4.6mm,5μm) was uesd.and temperature was set at 40℃.The mobile phase consisted of Acetonitrile —Water(10:90),with flow rate of 1.0ml·min-1.The UV detection wavelength was set at230nm.Results:The calibration curves of the Paeoniflorin were linear in the range of 0.1572μg～0.7860μg (r = 0.9998). Conclusion:This method apears to be simple,rapid,sensitive and accurate.
【Key words】Baotai Ling Tableta; Paeoniflorin; HPLC;content determination.
保胎靈片是一種補腎、固沖、安胎的純中藥制劑，用于先兆流產(chǎn)、習慣性流產(chǎn)及因流產(chǎn)引起的不孕癥。對長期不孕或流產(chǎn)后不孕者有促進妊娠作用，同時有增強機體免疫力和促進胎兒發(fā)育的功效，無毒副作用，宜長期服用。其質(zhì)量標準收載于《衛(wèi)生部頒藥品標準中藥成方制劑第四冊》，該標準只有顯微鑒別，沒有含量測定，本文采用高效液相色譜法對其處方中的白芍的主要成分芍藥苷進行了定量分析，取得了滿意的結(jié)果。
1 實驗材料
1.1 儀器 LC-2010AHT高效液相色譜儀(日本島津制作所);AE240型電子天平(瑞士梅特勒);KQ-400KDB型高功率數(shù)控超聲波清洗器(功率：400W，昆山市超聲儀器有限公司)。
1.2 藥品和試劑 芍藥苷(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110736-200628，供含量測定用);保胎靈片(吉林國藥制藥有限責任公司，批號：20070701;吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，批號：060101，051002);純化水(經(jīng)檢測合格)，乙醇為分析純，乙腈為色譜純。
2 方法與結(jié)論
2.1 色譜條件 色譜柱：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm);流動相：乙腈-水(10:90);檢測波長：230nm;柱溫：40℃;流速：1.0ml·min-1，進樣量：10μl;理論板數(shù)按芍藥苷計應不低于2000。
2.2 對照品溶液的制備
2.2.1 對照品貯備液 精密稱取減壓干燥的芍藥苷對照品10mg置25ml量瓶中加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得芍藥苷對照品濃溶液。
2.2.2 對照品溶液 精密量取對照品貯備液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。
2.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約1.0g，精密稱定，置具塞三角燒瓶中，精密加入30%乙醇溶液25ml，稱定重量，超
聲處理(功率250W，頻率40KHz)30分鐘，放冷，稱定重量，用溶劑補足減失重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.4 空白溶液的制備 取按處方比例制備但不含白芍的自制空白制劑，再按2.3項下的制備方法制成空白對照樣品溶液。
2.5 線性關系考察 精密吸取2.2.1項下的對照品貯備液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，分別精密吸取2、4、6、8、10μl，注入色譜儀進行測定，記錄色譜圖，以對照品進樣量為橫坐標(X)，色譜峰面積為縱坐標(Y)，求得回歸方程為：Y=98073.5000X-17548.2000(r=0.9998)，結(jié)果表明，芍藥苷進樣量在0.1572～0.7860μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。
2.6 精密度試驗 精密吸取2.3項下供試品溶液10μl，注入色譜儀，重復進樣6次，測定芍藥苷的色譜峰面積值分別為655076、658269、658663、658001、659049、655389，RSD為0.3%，結(jié)果表明本方法的精密度良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取2.3項下供試品溶液10μl，注入色譜儀，按0、2、4、8、12、24h間隔進樣，測得芍藥苷的色譜峰面積分別為677758、681397、683901、677074、681217、678807，RSD為0.4%。結(jié)果表明，供試品溶液在室溫條件下24h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.8 重現(xiàn)性實驗 取同一供試品，按2.3項下的方法平行制備6份供試品溶液并依法測定，結(jié)果每片含芍藥苷分別為0.5075、0.5124、0.5025、0.5169、0.5043，RSD為1.2%，結(jié)果表明本法重現(xiàn)性良好。
2.9 陰性對照試驗 精密吸取溶劑、空白樣品溶液、供試品溶液和對照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀測定。結(jié)果在空白樣品色譜圖中，在與芍藥苷對照品峰相同的保留時間處無吸收峰。
HPLC色譜圖(A陰性樣品;B對照品;C保胎靈片樣品)
2.10 加樣回收率試驗 取已知芍藥苷含量的供試品(060101 吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司，含量為0.5076mg/片)保胎靈20片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取6份，取量減半，分別精密加入對照品溶液(0.393mg/ml)1.9ml，再按2.3項下的方法制備供試品溶液，并依法測定，記錄色譜峰面積，按外標法計算出芍藥苷的平均回收率(n=6)100.04%，RSD=0.7%。
2.11 樣品測定 取2.2.2項下的對照品溶液和供試品(吉林國藥制藥有限責任公司 20070701;吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司 060101;吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司 051002)溶液各10μl進樣測定，以峰面積按外標法計算含量，結(jié)果3批樣品每片芍藥苷的平均含量分別為0.4081、0.4988、0.5525，RSD分別為0.40%、0.87%、0.54%。
3 討論
3.1 在對供試品提取溶劑的選擇中，我們采用了70%、50%和30%的乙醇溶液，結(jié)果用70%乙醇提取后，提取液的脂溶性雜質(zhì)多，純化處理困難;而50%和30%乙醇的提取液，濾過后直接進樣，即可得到較好的分離效果。同時，二者測得的結(jié)果沒有明顯的差異，鑒于從經(jīng)濟上考慮，我們采用了30%乙醇為提取溶劑。
3.2 在提取方法的選擇中，采取超聲提取和水浴回流提取兩種方法做對比，二者測得的結(jié)果沒有明顯的差異，但從簡便和節(jié)能上考慮，采用超聲處理法提取。
3.3 在流動相選擇中，采取三種洗脫系統(tǒng)，即乙腈-水(10:90)、甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(2: 13:85)和乙腈-0.1%磷酸二氫鉀溶液(10:90)。結(jié)果采用乙腈-水(10:90)為流動相，峰形與分離效果最好，所以予以采用，而后二者拖尾嚴重，故未采用。
3.4 色譜柱的選擇對該試驗影響較大，尤其對色譜峰的拖尾因子的影響更突出。
