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摘 要： 正確認(rèn)識什么是地高辛以及它的作用及治療方式有哪些呢， 并且它的危害又有哪些呢?應(yīng)該怎樣來確保及監(jiān)測這項技術(shù)呢?本文選自：《藥學(xué)與臨床研究》,《藥學(xué)與臨床研究》編委會是編輯部的強(qiáng)大后盾，其職責(zé)是把握報道方針及選題方向，審定論文學(xué)術(shù)水平，指導(dǎo)編輯
正確認(rèn)識什么是地高辛以及它的作用及治療方式有哪些呢， 并且它的危害又有哪些呢?應(yīng)該怎樣來確保及監(jiān)測這項技術(shù)呢?本文選自：《藥學(xué)與臨床研究》,《藥學(xué)與臨床研究》編委會是編輯部的強(qiáng)大后盾，其職責(zé)是把握報道方針及選題方向，審定論文學(xué)術(shù)水平，指導(dǎo)編輯出版工作，保證刊物學(xué)術(shù)水平和質(zhì)量。自創(chuàng)刊以來，《藥學(xué)與臨床研究》共有四屆編委會，歷屆編委會成員中醫(yī)藥行業(yè)專家，如彭司勛、王明貴、蔡寶昌、朱東亞等均擔(dān)任過(或正在擔(dān)任)《藥學(xué)與臨床研究》的重要職務(wù)。2010年進(jìn)行了編委會換屆工作，成立了新一屆的編委會。本屆編委會由中國工程院院士、973首席科學(xué)家和知名專家、教授組成。
摘要：地高辛，用于各種急性和慢性心功能不全以及室上性心動過速、心房顫動和撲動等。通�？诜�，對嚴(yán)重心力衰竭患者則采用靜脈注射。為由毛花洋地黃中提純制得的中效強(qiáng)心苷，其特點是排泄較快而蓄積性較小，臨床使用比洋地黃毒苷安全�？诜詹煌耆�，也不規(guī)則，生物利用度約為75%～88%。吸收率約50%～70%，起效時間為1～2小時，最大作用3～6小時，作用維持的時間4～7天。靜脈注射經(jīng)10～30分鐘生效，2～4小時達(dá)最大效應(yīng)，3～6天后作用消失。地高辛從尿中排出主要為原形物，少量為代謝物。
關(guān)鍵詞：地高辛,檢測方法,論文發(fā)表
1?免疫測定法(IA)
1.1?放射免疫測定法(RIA)
RIA法測定體內(nèi)地高辛血藥濃度基本原理:將標(biāo)記了抗原的放射性核素與受檢標(biāo)本中的抗原同時競爭抗體,檢測標(biāo)記到的抗原抗體復(fù)合物的放射性強(qiáng)度,推斷并確定地高辛的濃度。其檢測限可達(dá)0.01 μg/L,平均回收率為101.3%,日內(nèi)RSD=3.0%,日間RSD=6.5%[1]。RIA法優(yōu)點:檢測方法相對簡單,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,敏感性強(qiáng)、精密度好,準(zhǔn)確度佳、具有特異性,檢測成本較低等。RIA的缺點:檢測時間較長,標(biāo)記物的半衰期過短,易受代謝產(chǎn)物的干擾,存在不同程度的放射性污染,試劑盒有效期短且批間RSD偏大等[2]。
1.2?酶免疫測定法(EIA)
EIA法是一種非放射性免疫分析技術(shù),其在放射免疫分析理論的基礎(chǔ)上,用酶標(biāo)記抗原或抗體作為示蹤物,酶標(biāo)記物穩(wěn)定,靈敏度與RIA法接近,靈敏度高,操作簡便快捷,EIA法在一定程度上克服了RIA放射性危害和標(biāo)記物半衰期短的缺點[3],具有較強(qiáng)的特異性,有效期長等特點。
1.2.1?酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)?ELISA法靈敏度可高達(dá)0.04 ng/mL,是一種非均相免疫分析法的檢測技術(shù),有很高的檢測的準(zhǔn)確性和可靠性,實驗條件的環(huán)境要求較高,樣品不需做預(yù)處理且需求量較少,僅需5.0 μL,有效避免地高辛樣活性物質(zhì)的干擾。缺點主要是人為因素干擾檢測結(jié)果,酶穩(wěn)定性在孵育時間較長的情況下降低,長時間容易受到溫度和pH的影響,影響檢測結(jié)果精確性[4]。
1.2.2?克隆酶免疫測定法(CEDIA)?克隆酶免疫測定法原理:β-半乳糖苷酶通過DNA技術(shù)被裂解成2個無活性片段,酶受體和酶供體;兩個活性片段重組后形成具有催化活性的酶。β-半乳糖苷酶的水解底物氯酚紅-β-D-吡喃半乳糖苷顯紫紅色,而地高辛的血藥濃度與該酶生成量成正比�？寺∶该庖邷y定法與放射免疫測定法具有良好的相關(guān)性,具有較好的可靠性[5];批內(nèi)和批間變異系數(shù)均低于5%,具有較好的精密度[6];檢測速度快,且易于自動化操作、無放射性污染。
1.3?熒光免疫測定法(FIA)
熒光免疫分析技術(shù)是發(fā)展比較早的一種標(biāo)記免疫技術(shù),以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體而進(jìn)行抗原定位,主要應(yīng)用于微量、超微量位置分析測定。
1.3.1?熒光偏振免疫測定法(FPIA)?熒光免疫測定法是一種以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體而進(jìn)行抗原定位的技術(shù),常用于微量和超微量物質(zhì)的分析測定,作用原理:以蛋白競爭結(jié)合原理為基礎(chǔ),利用被測物質(zhì)中被測對象所具有的偏振光特性進(jìn)行測量,其不需分離游離及結(jié)合的熒光標(biāo)記物,測定周期短,無放射性污染。本法樣品預(yù)處理操作簡單,測定過程耗時較少,靈敏(最小檢出量為0.01 ng/mL),誤差范圍約2.57%~4.00%[7],雅培TDX儀的最低檢測限約為0.26 ng/mL[8],但FPIA測定結(jié)果易受本底熒光的干擾,所用儀器較復(fù)雜,地高辛濃度增加的假象時有發(fā)生[9]。
1.3.2?時間分辨熒光免疫測定法(TRFIA)?TRFIA是一種操作簡便,不受樣品自然熒光干擾的新型非放射性免疫標(biāo)記技術(shù),采用的示蹤物取代傳統(tǒng)的熒光標(biāo)記發(fā)光物質(zhì),運用新的熒光特性的鑭系元素及其螯合物,測定反應(yīng)產(chǎn)物在反應(yīng)體系發(fā)生后的熒光強(qiáng)度,用體系中分析物的濃度根據(jù)產(chǎn)物熒光強(qiáng)度和相對熒光強(qiáng)度的比值來判斷,從而達(dá)到定量分析[10]。同RIA法相比,本法靈敏度大大的提高;交叉反應(yīng)率低于FPIA法[11],無放射性污染,示蹤穩(wěn)定可多標(biāo)記,標(biāo)準(zhǔn)范圍寬等優(yōu)點。
1.4?化學(xué)發(fā)光免疫測定法(CLIA)
CLIA法檢測原理:當(dāng)被化學(xué)發(fā)光劑、催化發(fā)光酶或產(chǎn)物等標(biāo)記的抗體或抗原與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后,發(fā)光底物受上述標(biāo)記物的影響與產(chǎn)物發(fā)生氧化還原反應(yīng),激發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)射可見光,用分光光度計測量反應(yīng)發(fā)射的可見光。最低檢測限可達(dá)0.1 ng/mL,線性范圍為0~4.0 ng/mL,日內(nèi)RSD<4%,日間RSD<6.5%[12]。如有臨床癥狀難以鑒別或懷疑藥物過量中毒,可快速檢測。儀器設(shè)備及配套試劑目前較常用的是美國ACS:180 PLUS化學(xué)發(fā)光儀。本儀器靈敏度較高,但機(jī)器較貴、檢測費用較高,在臨床有一定的限制[13]。
1.5?干化學(xué)測定法(Dry chemical assay)
Dry chemical assay以異種酶排斥免疫為原理,結(jié)合了干化學(xué)分析技術(shù)和自動生化分析儀測定地高辛血藥濃度[14]。操作程序很大程度的簡化使得操作更簡便,大大縮短了檢測時間,地高辛濃度在0.5~4.0 μg/mL的有良好的線性關(guān)系(R =0.998 9),平均回收率為99.0%,日內(nèi)平均RSD=4.5%,日平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差=4.8%。本法測試成本小,操作簡便[15]。然而,有研究表明,本法平均測量值高于FPIA法[16]。
1.6?乳膠免疫抑制法(Emul Immuunodepression)
本法標(biāo)本用量小,對環(huán)境無污染,檢測速度快,但檢測結(jié)果穩(wěn)定性上尚存在一些問題,目前應(yīng)用較少[17]。
2?液相-質(zhì)譜聯(lián)用分析法(HPLC-MS-MS)
檢測質(zhì)量與放射免疫測定法相比,特異性較強(qiáng),能夠克服RIA法測定地高辛濃度時因EDLS產(chǎn)生的干擾,但本法所需儀器價格昂貴、操作繁瑣、靈敏度較差、檢測耗時較長,大大阻礙了其臨床推廣[18]。
3?毛細(xì)管電泳分離法(CE)
毛細(xì)管電泳兼有電泳和色譜技術(shù)的雙重優(yōu)點,對發(fā)生溶血、高脂血癥、黃疸的血漿樣本的分析有一定優(yōu)勢[19],但很少用于地高辛檢測。
4?人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法(ANN)
人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法(ANN)是基于模仿生物大腦的結(jié)構(gòu)和功能,從而構(gòu)成的一種電腦信息處理系統(tǒng)。利用收集的臨床資料,如地高辛使用者的年齡、性別、體重、血藥濃度、劑量等作為神經(jīng)元。神經(jīng)元之間既有聯(lián)系又相互獨立,既有局部的存儲和計算能力,又通過連接構(gòu)成統(tǒng)一的系統(tǒng)。ANN以具有局部計算能力的神經(jīng)元為基礎(chǔ),實現(xiàn)信息的大規(guī)模并行處理,以預(yù)測地高辛的血藥濃度[20]。使用MATLAB軟件中的BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)工具箱編程,對數(shù)據(jù)進(jìn)行篩選和智能分析,建立相應(yīng)的數(shù)學(xué)模型,較好地處理各個因素的復(fù)雜關(guān)系,具有很好的非線性處理能力。本法在繁雜的群體藥效/藥動學(xué)方面發(fā)揮著普通計算機(jī)無法比擬的優(yōu)勢,為血藥濃度預(yù)測提供了一條有效的思路,在臨床藥學(xué)領(lǐng)域擁有誘人的應(yīng)用前景。
5?分子印跡技術(shù)
應(yīng)用分子印跡的技術(shù)制備對地高辛有特異吸附性能的印跡聚合物顆粒,再將顆粒與瓊脂糖混合,并固定與玻碳電極上,制備成地高辛分子印跡聚合膜傳感器。傳感器可以特異性的結(jié)合膜分子地高辛,且其電化學(xué)信號與模板濃度有關(guān),再用它來檢測血漿中地高辛的含量。本法制作簡單,成本低,特異性高,檢測快速,穩(wěn)定性好最低檢測下限可達(dá)1.28 nmol/L,線性檢測范圍為1.28~128 nmol/L,檢測時間可短至5 min,可靠性佳[21]。
此外,逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)、抗地高辛抗體片段技術(shù)[22]等也日趨成熟,今后可能會用于地高辛血藥濃度的檢測。各種地高辛檢測方法均以其各自獨特的優(yōu)勢在臨床廣泛應(yīng)用,地高辛的檢測技術(shù)將日益成熟、規(guī)范。
