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摘 要： 【摘 要】目的：研究注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液配伍的毒性和含量變化情況，為臨床合理用藥提供依據。方法：通過小鼠急性毒性試驗，了解兩者配伍后毒性變化;采用高效液相方法檢測兩者配伍后含量變化情況。結果：注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉
【摘 要】目的：研究注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液配伍的毒性和含量變化情況，為臨床合理用藥提供依據。方法：通過小鼠急性毒性試驗，了解兩者配伍后毒性變化;采用高效液相方法檢測兩者配伍后含量變化情況。結果：注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液配伍前后主要成分含量無明顯變化，但兩者配伍后毒性增加。結論：注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液不宜在臨床上配伍使用。
【關鍵詞】注射用血栓通(凍干);鹽酸克林霉素注射液;配伍;毒性;含量
注射用血栓通(凍干)是由三七傳統用藥部位主根提取三七總皂苷制成的靜脈注射劑，說明書功能主治為活血祛瘀，通脈活絡，用于瘀血阻絡，中風偏癱、胸痹心痛及視網膜中央靜脈阻塞癥。注射用血栓通(凍干)臨床廣泛用于心腦血管、視網膜中央靜脈阻塞等疾病的治療。鹽酸克林霉素注射液屬注射劑類抗菌素，用于各種中、重度感染性疾病。在臨床實際運用中，注射用血栓通(凍干)往往會與抗生素聯合使用，有報道注射用血栓通(凍干)聯合頭孢類抗生素引起五例不良反應[1]，不良反應表現為皮疹、瘙癢。目前尚未見注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液合用配伍的研究報道。因此，本研究主要了解注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液配伍的毒性和含量變化情況，為臨床合理用藥提供依據。
1 材料
1.1 實驗動物
昆明小鼠，18g～22g，由廣西梧州制藥(集團)股份有限公司動物實驗研究中心提供，許可證號： SCXK- 桂 2018-0002。
1.2 藥物與試劑
注射用血栓通(凍干)(批號：17060415)，由廣西梧州制藥(集團)股份有限公司生產;鹽酸克林霉素注射液(批號：X170312)，購自重慶萊美藥業股份有限公司;乙腈為色譜純(批號：R141298)，購自 DIKMA 公司;克林霉素對照品(批號：130664-201401)，購自中國食品藥品檢定研究院;三七總皂苷對照品(批號：110870-201603)，購自中國食品藥品檢定研究院。
1.3 實驗儀器
低速大容量多管離心機;生化培養箱;電子天平;高效液相色譜儀。
2 方法
2.1 急性毒性試驗
小鼠按體重大小、雌雄各半的原則隨機分組，每組 10 只。將注射用血栓通(凍干)、鹽酸克林霉素注射液配制成系列濃度，制備混合樣品制成系列濃度，其中固定注射用血栓通(凍干)的濃度為最大給藥濃度 75mg·kg-1，濃度為 3.75mg·mL-1。每只 0.02mL·g-1 尾靜脈注射給藥，給藥后連續觀察 7d，每天記錄各劑量組小鼠的死亡數，求出各藥劑量對數與死亡概率的回歸方程，計算混合物對小鼠的 LD50[2]。
2.2 含量測定
2.2.1 供試溶液配制
(1)注射用血栓通(凍干)溶液配制(A 溶液)：精密稱定注射用血栓通(凍干)125mg，置 25mL 量瓶中，加氯化鈉注射液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
(2)鹽酸克林霉素注射液溶液(B 溶液)：直接精密吸取鹽酸克林霉素注射液 2mL，置 50mL 量瓶中，加氯化鈉注射液稀釋至刻度，搖勻，即得。
(3)混合溶液(C 溶液)：精密稱定注射用血栓通(凍干)125mg，置 25mL 量瓶中，滴加上述鹽酸克林霉素注射液 B 溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.2.2 測定三七總皂苷各成分的含量
采用注射用血栓通(凍干)質量標準的含量測定方法。色譜柱：Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm);流動相：乙腈-水(梯度洗脫);檢測波長：203nm;流速：1.0mL·min-1;進樣量：10μL。對照品溶液的制備：三七總皂苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 1mL 含 4mg 的溶液，搖勻，即得。供試溶液的制備：精密吸取“2.2.1”項下 A、C 適量，加甲醇分別制成每 1mL 含 4mg 的溶液，分別作為單組份供試液、混合液供試液。
2.2.3 鹽酸克林霉素注射液含量測定
采用鹽酸克林霉素注射液質量標準的含量測定方法。 色譜柱：Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm);流動相：磷酸二氫鉀溶液(每 1mL 中含磷酸二氫鉀 6.8mg，用 25%氫氧化鉀溶液調節 pH 值至 7.5)-乙腈(55∶45);檢測波長： 210nm;流速：1.0mL·min-1;進樣量：20μL。對照品溶液的制備：取克林霉素對照品本品適量，精密稱定，用流動相定量稀釋制成每 1mL 中含克林霉素 1mg 的溶液，搖勻，即得。供試溶液的制備：精密吸取“2.2.1”項下 B、C 適量，加流動相分別制成每 1mL 含 1mg 的溶液，分別作為單組份供試液、混合液供試液。按上述色譜方法分別測定“2.2.1”項下三種溶液中三七總皂苷中三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Re、人參皂苷 Rb1和人參皂苷 Rd 的含量和克林霉素含量，然后將上述三種溶液放置 4h 后，再按上述色譜方法測定。通過比較 0h 和 4h 含量變化，考察注射用血栓通(凍干)和鹽酸克林霉素注射液配伍后對相互含量的影響大小。
3 結果
3.1 急性毒性試驗結果
注射用血栓通(凍干)5 個劑量組 840.0mg·kg-1、756.0 mg·kg-1、680.4mg·kg-1、612.4mg·kg-1、551.1mg·kg-1，對應的小鼠死亡數分別為：10 只、8 只、4 只、2 只和 0 只;鹽酸克林霉素注射液溶液 5 個劑量組 280.0mg·kg-1、252.0mg·kg-1、 226.8mg·kg-1、204.1mg·kg-1、183.7mg·kg-1，對應的小鼠死亡數分別為：10 只、9 只、8 只、3 只和 0 只;混合液 4 個劑量組 226.8mg·kg-1、204.1mg·kg-1、、183.7mg·kg-1、157.2mg·kg-1，對應的小鼠死亡數分別為：10 只、6 只、4 只和 0 只。注射用血栓通(凍干)回歸方程：Probit(A)=-64.682+22.801 ×lnX(X 為注射用血栓通(凍干)劑量);鹽酸克林霉素注射液溶液回歸方程：Probit(B)=-59.600+25.535×lnX(X 為克林霉素劑量)。計算得到 Q=4.73。因此，可以認為兩者配伍后毒性增強。實驗結果見表 1 所示。
3.2 含量測定結果
3.2.1 注射用血栓通(凍干)溶液中三七總皂苷各成分的含量測定結果
根據 SPSS 16.0 統計，注射用血栓通(凍干)溶液中三七總皂苷的三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Re、人參皂苷 Rb1和人參皂苷 Rd 在 0h、4h 測定的含量比較，無統計學差異(P>0.05)，即提示注射用血栓通(凍干)溶液中三七總皂苷的三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Re、人參皂苷 Rb1 和人參皂苷 Rd 在 4h 內含量穩定。注射用血栓通(凍干)溶液中三七總皂苷各成分的含量測定結果如表 2 所示。
3.2.2 鹽酸克林霉素注射液溶液中克林霉素含量測定結果
由于 P>0.05，故可認為 0h、4h 測定含量數據無統計學差異，提示鹽酸克林霉素注射液溶液中克林霉素 4h 內含量穩定。鹽酸克林霉素注射液溶液中克林霉素含量結果如表 3 所示。
3.2.3 混合液的含量測定結果
分別檢測混合液中三七總皂苷的三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Re、人參皂苷 Rb1和人參皂苷 Rd 的含量和克林霉素含量。根據混合液中三七總皂苷各成分的含量結果(見表 2)，由于 P>0.05，故可認為 0h、4h 測定的含量數據無統計學差異，提示混合液在 4h 內三七總皂苷各成分的含量穩定。
根據混合液中克林霉素含量結果(見表 3)，由于 P>0.05，故可認為 0h、4h 測定的含量數據無統計學差異，提示混合液在 4h 內克林霉素含量穩定。
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4 討論
急性毒性(Acute toxicity)是指藥物在單次或 24h 內多次給予后一定時間內所產生的毒性反應。狹義的單次給藥毒性研究(Single dose toxicity study)是考察單次給予受試物后所產生的急性毒性反應。本指導原則所指為廣義的單次給藥毒性研究，可采用單次或 24h 內多次給藥的方式獲得藥物急性毒性信息。單次給藥毒性試驗所獲得的信息對重復給藥毒性試驗的劑量設計和某些藥物臨床試驗起始劑量的選擇具有重要參考價值，并能提供一些與人類藥物過量所致急性中毒相關的信息[4]。
《中藥注射劑臨床使用基本原則》中規定功能相同或基本相同的中成藥聯合使用時不宜疊加，兩種以上中藥注射劑聯合應用應遵循主治功效互補及增效減毒原則。中藥注射劑由于成分復雜，當與其他藥品配伍后，可發生氧化或聚合等反應，或者由于配伍引起 PH 變化而析出不溶性微粒[4,5]，導致不良反應的發生。轉化糖電解質與注射用血栓通配伍液含有不同粒徑和數量的不溶性微粒，且均超過2010年版《中華人民共和國藥典》標準[6]。轉化糖電解質與注射用血栓通配伍可導致微粒超標。注射用血栓通(凍干)的說明書【藥物相互作用】尚無本品與其他藥物相互作用的信息。鹽酸克林霉素注射液的說明書【藥物相互作用】提到本品不宜加入組份復雜的輸液中，以免發生配伍禁忌。由于鹽酸克林霉素注射液單獨使用也能導致不良反應，與注射用血栓通(凍干)合用后可導致過敏源增加，從而提高了不良反應發生率。
在本研究中，采用了概率和法(method of probability sum)，用 Q 值反映配伍間的關系，如作用單純相加、增強、顯著增強、拮抗或顯著拮抗。而本實驗結果表明，注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液配伍后急性毒性增強。因此，在臨床上，注射用血栓通(凍干)和鹽酸克林霉素注射液不宜配伍使用，以減少可能的不良反應。由于注射用血栓通(凍干)與鹽酸克林霉素注射液的混合液中三七總皂苷的三七皂苷 R1、人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Re、人參皂苷 Rb1和人參皂苷 Rd 含量和克林霉素含量變化不大，而急性毒性增強，可能因為注射用血栓通(凍干)有 5 個主要成分，組份復雜，這需要進一步對兩者配伍進行研究，比如配伍后的 PH 值、粒徑、滲透壓等。
綜上所述，注射用血栓通(凍干)和鹽酸克林霉素注射液在臨床上不宜配伍使用，如確實不可避免需要聯合使用，則需采用間隔給藥及沖管等方式，以減少可能的不良反應事件發生。
