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摘 要： 摘要：大草烏向后彎曲，無毛;雄蕊多數(shù)，花絲全緣或有2枚小齒，無毛;心皮5，無毛或上部疏生短毛。萵葖果，長1.6-1.8cm，無尾。種子多數(shù)，三棱形，長約3mm，只在一面密生橫膜翅。花期8-9月，果期9-10月。 關(guān)鍵詞：大草烏,抗氧化性,農(nóng)業(yè)技術(shù), 農(nóng)業(yè)科技論文發(fā)表
摘要：大草烏向后彎曲，無毛;雄蕊多數(shù)，花絲全緣或有2枚小齒，無毛;心皮5，無毛或上部疏生短毛。萵葖果，長1.6-1.8cm，無尾。種子多數(shù)，三棱形，長約3mm，只在一面密生橫膜翅。花期8-9月，果期9-10月。
關(guān)鍵詞：大草烏,抗氧化性,農(nóng)業(yè)技術(shù),農(nóng)業(yè)科技論文發(fā)表
黃草烏，多年生昌本。塊根橢圓球形或胡蘿卜形，長2.5-7cm，直徑約1cm。莖纏繞，長達(dá)4m，有分枝，疏被反曲短柔毛或幾無毛。葉互生;葉柄與葉片近等長;葉片五角形，長5-10cm，寬8-16cm，基部寬心形，3全裂或達(dá)近基部，中央全裂片寬菱形，側(cè)全裂片斜扇形，不等2裂略超過中部，上面疏被緊貼的短柔毛，下面葉脈疏被短柔毛。花序有3-6朵花，花序軸和花梗密被淡黃色反曲短柔毛;苞片線形;花梗長2-4cm;小苞片生花梗中部或下部，狹線形，長3-5mm，密被短柔毛;花兩性，兩側(cè)對稱;萼片5，花瓣?duì)睿陷嗥呖危?.7-2cm，下緣1.5-1.6cm，與外緣毛;花瓣2，唇長約6mm，微凹，距長約3mm，
膝瓣烏頭，多年生草本，高約1m。莖直立，具分枝，無毛。葉互生;葉柄長3-5cm，基部具鞘，無毛;葉片圓五角形，長寬均為6-10cm，基部心形，3深裂至近基部，中央深裂片菱形，3裂，側(cè)深裂片斜扇形，2深裂超過中部，上面只脈上疏被緊貼的短柔毛，下面無毛。總狀花序近傘房狀，長3-8.5cm，有花2-8朵;花序軸和花梗均無毛;苞片葉狀;花梗長2-4cm;小苞片生花梗中部，線形，長3.5-4.5cm，無毛。花兩性，近兩側(cè)對稱;花萼5，花部，線形，長3.5-4.5cm，無毛。花兩性，近兩側(cè)對稱;花萼5，花瓣?duì)睿陷嗥呖危呒s1.6cm，下緣長1.5-1.8cm，外緣近垂直，與下緣形成不明顯的短喙或幾無喙，側(cè)萼片寬倒卵形，長1.3-1.4cm，內(nèi)面先端膝狀彎曲，瓣片長約1.1cm，唇長4.5mm，末端2淺裂，距長約2.5mm，向后彎曲，無毛;雄蕊多數(shù)，花絲全緣或具2枚小牙齒，無毛;心皮5，無毛。萵葖果。種子多數(shù)。花期7月，果期8月。
黃酮類化合物是自然界中一類重要的天然有機(jī)化合物，廣泛存在于藥用植物、水果和蔬菜中，特別是在高等植物的花、葉、根中較多[2]。黃酮類化合物具有多種生物活性，有抗?jié)儭⒖?a href='http://www.lovetv5.com/qikan/gm/' target='_blank'>過敏、抗菌、抗炎、抗氧化、降血脂、治療心腦血管疾病等功能。隨著研究方法的不斷更新和改進(jìn)，新的黃酮類化合物不斷被發(fā)現(xiàn)，其應(yīng)用更加廣泛[3]。目前，對大草烏的分析研究報(bào)道較少，為進(jìn)一步開發(fā)大草烏的藥用價(jià)值，本研究對野生大草烏中總黃酮的提取與抗氧化性進(jìn)行分析，旨在為大草烏的研究與推廣應(yīng)用，以及推進(jìn)藥用植物的發(fā)展提供科學(xué)的依據(jù)。
大草烏(Aconitum vilmorinianum)為毛茛科植物黃草烏和膝瓣烏頭的塊根，主要分布于四川會理、貴州西部和云南中部，具有祛風(fēng)散寒、活血止痛、解毒消腫的功效，主治風(fēng)寒濕痹、手足厥冷、跌打損傷和瘡毒[1]。大草烏有毒且苦，在云南種植及應(yīng)用廣泛，屬于菜藥兼用植物。
1 材料與方法
1.1 試驗(yàn)材料
野生大草烏購于云南省紅河州個(gè)舊市集市，產(chǎn)地為個(gè)舊市老廠鎮(zhèn)。大草烏樣品先用去離子水沖洗干凈，在105 ℃烘干，然后研細(xì)備用。
1.2 儀器與試劑
UV-4802S型紫外-可見分光光度計(jì)(上海尤尼柯儀器有限公司);BS224S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);OSB-2100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司);TDL80-2B型臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司);恒溫烘箱;恒溫水浴鍋;索氏提取器;粉粹機(jī)。
蘆丁對照品、無水乙醇、石油醚(60～90 ℃)、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、鄰苯三酚、Tris等試劑均為分析純;鹽酸為優(yōu)級純;試驗(yàn)用水為去離子水。
1.3 大草烏總黃酮的提取
1.3.1 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對大草烏總黃酮提取的影響 分別準(zhǔn)確稱取4.000 0 g干燥的大草烏粉末6份，用濾紙包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃條件下回流5 h，取除脂后的大草烏在60 ℃下烘干，分別用100 mL 40%、50%、60%、70%、80%、90%乙醇溶液在85 ℃條件下回流2次，每次3 h，合并濾液后抽濾，55 ℃減壓蒸餾至無醇味，4 800 r/min離心15 min，將上清液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，分別用相應(yīng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇定容，得到大草烏總黃酮提取液[4-9]。
1.3.2 不同回流時(shí)間對大草烏總黃酮提取的影響 分別準(zhǔn)確稱取4.000 0 g干燥的大草烏粉末5份，用濾紙包好后置于索氏提取器中，用100 mL石油醚在80 ℃條件下回流5 h，取除脂后的大草烏在60 ℃下烘干，用100 mL 70%乙醇溶液在85 ℃條件下回流2次，回流時(shí)間分別為1、2、3、4、5 h，合并濾液后抽濾，55 ℃減壓蒸餾至無醇味，在4 800 r/min離心15 min，將上清液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容，得到大草烏總黃酮提取液。
1.4 分析方法
1.4.1 波長的選擇 將標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液以乙醇為空白對照，在波長200～800 nm進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液在波長510 nm處有最大吸收，故選定510 nm為測定波長。
1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確稱取蘆丁對照品5 mg，用60%乙醇溶解，并轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，得到濃度為0.100 0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL，分別置于10 mL比色管(此處試驗(yàn)所用儀器為比色管，用分光光度計(jì)測定時(shí)用比色皿)中，各加60%乙醇至5 mL，再分別加入5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)的NaNO2溶液0.50 mL，搖勻，室溫放置6 min，加10%的Al(NO3)3溶液0.50 mL搖勻，室溫放置6 min，加4%的NaOH溶液 4.00 mL搖勻，室溫放置15 min，用紫外-可見分光光度計(jì)在510 nm波長下測定吸光度，同時(shí)以試劑空白作參比。以吸光度A為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.4.3 總黃酮含量的測定 準(zhǔn)確吸取總黃酮提取液1.00 mL，置于10 mL比色管(此處試驗(yàn)所用儀器為比色管，用分光光度計(jì)測定時(shí)用比色皿)中，補(bǔ)加相應(yīng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇至5 mL，其他步驟按“1.4.2”的方法操作，在510 nm波長下平行測定3次。根據(jù)回歸方程，計(jì)算總黃酮濃度。根據(jù)公式：總黃酮含量=[提取液濃度(mg/mL)×稀釋倍數(shù)×體積(mL)/樣品干重(g)×1 000]×100%，計(jì)算大草烏總黃酮含量。
1.5 清除超氧陰離子自由基能力的測定
取4.5 mL 50 mmol/L的Tris-HCl緩沖溶液，加4.2 mL去離子水混勻后在25 ℃水浴中保溫20 min，取出后立即加入在25 ℃預(yù)熱過的3 mmol/L鄰苯三酚0.3 mL，迅速搖勻后倒入比色皿，420 nm波長下每隔30 s測定吸光度，以10 mmol/L的HCl代替鄰苯三酚作為空白對照。
按照上述操作步驟在加入鄰苯三酚前先加入0.1 mL的總黃酮提取液，同樣用10 mmol/L的HCl作空白對照，測定吸光度，并按以下公式計(jì)算清除率：
超氧陰離子自由基清除率=(A1-A2)/A1×100%
式中，A1為鄰苯三酚自氧化平均吸光度;A2為加入樣品后鄰苯三酚自氧化平均吸光度。
2 結(jié)果與分析
2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
以吸光度A為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度C為橫坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。所得回歸方程為A=7.714 3C+0.004 3，R2=0.997 4。
2.2 不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對大草烏總黃酮提取的影響
由表1可知，不積分?jǐn)?shù)的增大，大草烏總黃酮的含量也逐漸增大;乙醇體積分?jǐn)?shù)從70%升高到90%時(shí)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，大草烏總黃酮的含量稍有減小，70%乙醇提取的大草烏總黃酮含量最高，達(dá)1.456%。說明，大草烏中的總黃酮一部分為脂溶性，部分為水溶性(大草烏水提取液能與氯化鐵反應(yīng)顯示出較深的顏色)。
2.3 不同回流時(shí)間對大草烏總黃酮提取的影響
由表2可知，不同回流時(shí)間對大草烏總黃酮提取的影響不同。回流1～3 h時(shí)，隨著回流時(shí)間的增長，大草烏總黃酮的含量逐漸增大;回流時(shí)間3～5 h，隨著回流時(shí)間延長，大草烏總黃酮的含量有所減小，3 h時(shí)大草烏總黃酮含量最高，達(dá)1.457%。可能是回流時(shí)間過長會提取出其他成分與黃酮相互作用，使提取的總黃酮含量降低。
以上分析結(jié)果可知，用70%乙醇回流提取3 h，大草烏總黃酮含量最高。在此條件下，通過3次平行試驗(yàn)測定得到大草烏總黃酮含量為1.457%。
2.4 大草烏黃酮對超氧陰離子自由基的清除作用
通過測定，大草烏總黃酮對超氧陰離子自由基有明顯的清除作用，清除率達(dá)到34.49%。說明大草烏總黃酮具有一定的抗氧化作用。由此可見，大草烏具有較高的藥用價(jià)值。
采用不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對大草烏總黃酮進(jìn)行提取，大草烏中的總黃酮一部分為脂溶性，部分為水溶性，這與羅晶[10]對紅景天分析的結(jié)果一致。本試驗(yàn)結(jié)果中測定的大草烏總黃酮含量為1.457%，與畢和平等[11]分析的穿心蓮結(jié)果比較，大草烏中總黃酮含量比穿心蓮的高，與劉偉玲[12]分析的刺五加葉中總黃酮的結(jié)果比較，大草烏中總黃酮含量則比刺五加葉中的低。說明不同藥用植物中總黃酮含量不同。
本試驗(yàn)結(jié)果表明，以石油醚脫脂、乙醇回流可提取野生大草烏中總黃酮，提取的最佳條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，回流提取時(shí)間3 h，此條件下提取的野生大草烏中總黃酮含量最高，達(dá)到1.457%。大草烏總黃酮對超氧陰離子自由基有明顯的清除作用，清除率為34.49%，說明大草烏總黃酮具有一定的抗氧化作用，且具有較高的藥用價(jià)值。
