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摘 要： 論文摘要：用升汞將玉米成熟種子消毒,在無菌水中浸泡24小時后,在LS培養液中再浸泡48小時,然后轉到MS培養基上。待出芽后將芽切掉,將種子縱切,放到LS愈傷誘導培養基上,進行愈傷誘導。待長出愈傷后,將其轉到N6的分化培養基上,分化出幼苗。 合適的受體材料是玉米
論文摘要：用升汞將玉米成熟種子消毒,在無菌水中浸泡24小時后,在LS培養液中再浸泡48小時,然后轉到MS培養基上。待出芽后將芽切掉,將種子縱切,放到LS愈傷誘導培養基上,進行愈傷誘導。待長出愈傷后,將其轉到N6的分化培養基上,分化出幼苗。
合適的受體材料是玉米成功轉化的關鍵,本實驗試圖通過成熟玉米來誘導愈傷,為轉化提供材料。選取生產上常用的幾個玉米系為材料,參考相關文獻,摸索組織培養條件將成熟胚誘導愈傷,來獲得再生植株。
關鍵詞：玉米,成熟胚,愈傷誘導,植株再生
近年來,隨著基因工程技術的不斷深入,玉米的遺傳轉化也取得了一些進步,合適的受體材料是玉米轉化成功的關鍵,所以必須對受體材料進行鑒定和篩選,保證轉化后能夠得到可育的植株。
幼胚是玉米遺傳轉化中使用最多的外植體 [1,2]。但幼胚組織培養受基因型的控制[3],而且取材的時間受到嚴格的季節限制。能否通過成熟胚誘導愈傷獲得再生植株呢,Green等最早報道了玉米的成熟胚可誘導愈傷組織,但未能獲得再生植株。Wang[4]用玉米自交系A632,B73和Mo17的成熟胚誘導愈傷,使用的培養基為含有1~2毫克/升2,4-D的MS,愈傷組織誘導頻率為23%~100%,其中Mo17誘導頻率最高,并且B73和Mol7中有4%~5%的外植體得到了再生植株。Huang等[5]利用七個自交系材料進行了成熟胚誘導實驗,由成熟胚誘導愈傷組織再生植株的效率達到了19.8%~32.4%。隨后Diaa等人[6]也將成熟胚縱切,用含2,4-D的LS培養基誘導出愈傷并獲得再生植株。
選取生產上常用的幾個玉米品系為材料,參考相關文獻,摸索組織培養條件將成熟胚誘導愈傷,來獲得再生植株。
1 材料和方法
1.1 材料
供試材料為農大108、X08、X090、Q319和X178,基本培養基為LS誘導培養基,N6培養基。
1.2 方法
用升汞將玉米成熟種子消毒,在無菌水中浸泡24小時后,在LS培養液中再浸泡48小時,然后轉到MS培養基上。待出芽后將芽切掉,將種子縱切,放到LS愈傷誘導培養基上,進行愈傷誘導。待長出愈傷后,將其轉到N6的分化培養基上,分化出幼苗。
2 結果與分析
表1 五種玉米品系成熟胚誘導再生植株數量
五個玉米品系中均能長出愈傷,其中農大108效果最好,具體情況見表1,但當將愈傷組織轉移到分化培養基上后,愈傷長勢變慢,顏色變褐。有的愈傷轉移到分化培養基上之后,部分變綠,但不能分化,僅有農大108的愈傷分化出幼苗。
3 結論
通過本實驗的研究表明,玉米縱切后愈傷的誘導率明顯增加,但是分化出植株的比例很低,可能跟后期所用的誘導分化培養基有關;該實驗還表明基因型是影響愈傷誘導率的決定性因素, 基因型不同愈傷組織的誘導率和分化率都有很大的差異, 本實驗中農大108做為供試材料,誘導愈傷數量最多,同時也是唯一分化出幼苗的,供試材料中的X090是愈傷誘導率最低的,而且誘導出的愈傷很快褐化,不能再生。
參考文獻
[1] 樸蓮玉,宮赫陽,孫盼盼,許明子,鄭大浩.玉米成熟胚愈傷組織誘導及其影響因素研究.延邊大學農學學報,2013,35(1):73-76.
[2] Frame B.R.,Shou H.,Chikwamba R.K.et al.Agrobacterium tumefaciens-mediated transf ormation of maize embryos using a standard binary vector system.Plant Physiol,2002,129:13-22
[3] Frame B.R.,Zhang H.,Cocciolone S.M.et al. Production of transgentic maize from bombarded type II callus:effect of gold particle size and callus morphology on transformation efficiency.In Vitro Cell Dev Biol Plant.2000,36:21-29.
[4] Wang AS.Callus induetion and Plan tregeneration from maize mature embryos.Plant Cell ReP,1987,6:360-362.
[5] Huang S.,Adams W.R.,Zhou Q.,et al.Improving nutritional quality of maize proteins by expressing sense and antisense zein genes.J.Agric. Food Chem.2004,52:1958-1964.
[6] Diaa A.A.,Sairam R.and Reddy T.S.G.Split-seed:a new tool for maize researchers.Planta,2006,223:1355-1360.
