發(fā)布時(shí)間：2022-05-19所屬分類：農(nóng)業(yè)論文瀏覽：1次
摘 要： 摘 要：【目的】探索噬菌體作為控制養(yǎng)殖環(huán)境致病性大腸桿菌的新手段�！痉椒ā勘狙芯窟M(jìn)行了大腸桿菌噬菌體的分離及相應(yīng)指標(biāo)評(píng)估。通過雙層平板法從養(yǎng)殖環(huán)境中分離禽致病性大腸桿菌裂解性噬菌體。通過電鏡及酶切鑒定、溫度及酸堿穩(wěn)定性、最佳感染復(fù)數(shù)、一步生長(zhǎng)曲線及其
摘 要：【目的】探索噬菌體作為控制養(yǎng)殖環(huán)境致病性大腸桿菌的新手段。【方法】本研究進(jìn)行了大腸桿菌噬菌體的分離及相應(yīng)指標(biāo)評(píng)估。通過雙層平板法從養(yǎng)殖環(huán)境中分離禽致病性大腸桿菌裂解性噬菌體。通過電鏡及酶切鑒定、溫度及酸堿穩(wěn)定性、最佳感染復(fù)數(shù)、一步生長(zhǎng)曲線及其在模擬環(huán)境中的殺菌效果對(duì)該噬菌體進(jìn)行綜合性評(píng)估。【結(jié)果】分離得到的噬菌體具有正多面體的頭部和細(xì)而長(zhǎng)的尾部結(jié)構(gòu)，頭部直徑約98nm，尾部長(zhǎng)約123nm，結(jié)合酶切鑒定結(jié)果初步判定該噬菌體為肌尾科雙鏈 DNA 噬菌體。該噬菌體的溫度耐受范圍為37～50 ℃;酸堿耐受范圍為pH3.0～11.0。當(dāng)感染復(fù)數(shù)為0.00001時(shí)產(chǎn)生的子代噬菌體滴度最高;一步生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果顯示，該噬菌體潛伏期為20～40min，裂解時(shí)間為80～100min，裂解量為4133PFU/cell。從該噬菌體對(duì)模擬環(huán)境中宿主大腸桿菌的殺菌效果可看出，濃 度 為 1×104 ～1×106 PFU/mL 的 噬 菌 體 ФECP2-1對(duì)液體中目標(biāo)大腸桿菌作用1～6h，殺菌率均在99.9%以上;濃度為2×104～2×106 PFU/g的 噬菌 體 ФECP2-1對(duì)雞糞中目標(biāo)大腸桿菌作用5～10h，殺菌率均在99%以上，該噬菌體對(duì)雞糞中目標(biāo)大腸桿菌殺菌效果略低于對(duì)液體中目標(biāo)大腸桿菌的殺菌效果�！窘Y(jié)論】ФECP2-1符合噬菌體類消毒劑相關(guān)特征，是一株具有良好應(yīng)用前景的噬菌體，可作為一種生物消毒劑應(yīng)用于養(yǎng)殖環(huán)境中禽大腸桿菌的防控。
關(guān)鍵詞：禽大腸桿菌;裂解性噬菌體;生物學(xué)特性;殺菌效果
禽致病性大腸桿菌(avianpathogenicEscherichiacoli，APEC)是一種腸外致病性大腸桿菌，可引起禽類大腸桿菌病，并常與其他呼吸道疾病混合感染，引發(fā)禽類腹膜炎、肝周炎、心包炎等病變，嚴(yán)重的可引發(fā)敗血癥，導(dǎo)致禽類死 亡[1-2]。此 外，禽大 腸 桿 菌 病不僅會(huì)降低禽類生產(chǎn)性能，提高死亡率，與其他疾病混合感染還會(huì)加重病情，降低疫苗免疫效力[3]。
目前國內(nèi)外防治禽大腸桿菌病的主要手段仍為抗生素，但抗生素的長(zhǎng)期使用所引發(fā)的藥物殘留等食品安全問題及產(chǎn)生耐藥菌等問題已引起了廣泛關(guān)注[4-5]。因此，亟需開發(fā)安全、高 效 的 禽 大 腸 桿 菌 病防治手段。鑒于該病的自然感染途徑主要通過呼吸系統(tǒng)及消化系統(tǒng)兩方面單獨(dú)或協(xié)同誘發(fā)，從調(diào)控養(yǎng)殖環(huán)境中致病性大腸桿菌的數(shù)量入手，對(duì)于防控該病的發(fā)病率具有重要的生物安全意義。
噬菌體作為一種專一侵襲目標(biāo)細(xì)菌的病毒，具有繁殖迅速、特 異 性 強(qiáng) 的 優(yōu) 勢(shì)，能快速裂解目標(biāo)菌株，從而達(dá)到殺菌的目的。自被發(fā)現(xiàn)至今一百多年的時(shí)間里，研究者一直嘗試著將其作為新型抗菌劑應(yīng)用于病原菌的防控，且有些已在國外獲批上市[6]。大量研究表明，噬菌體對(duì)人及動(dòng) 物 是 安 全 的[7-9]，噬菌體作為一種可替代抗生素的生物制劑及環(huán)境改良劑，具有廣闊的應(yīng)用前景。
本研究以 O2血清型禽大腸桿菌為研究對(duì)象，從養(yǎng)殖環(huán)境中分離相應(yīng)的噬菌體，并對(duì)噬菌體的生物學(xué)特性及環(huán)境殺菌效果進(jìn)行綜合評(píng)估，以期為噬菌體制劑的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 菌 株
宿 主 菌 O2 血 清 型 禽 大 腸 桿 菌CVCC1552購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所菌種保藏中心。
1.1.2 主要試劑及儀器
胰 蛋白 胨 大 豆 肉 湯(TSB)培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)培養(yǎng)基均購自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司;Tris-HCl緩 沖 溶 液 購 自 北 京 索 萊 寶 科 技 有 限 公 司;PEG8000購自長(zhǎng)春天佳生物技術(shù)有限公司;氯仿購自重慶川東化工有限 公 司;DNase Ⅰ、RNaseA、微量病 毒 提 取 試 劑 盒、限 制 性 核 酸 內(nèi) 切 酶 EcoRⅠ、HindⅢ均購自寶生物工程(大連)有限公司;0.22μm微孔濾膜購自PALL公司。超凈工作臺(tái)、電熱恒溫培養(yǎng)箱、恒溫振蕩培養(yǎng)箱等均購自山東博科科學(xué)儀器有限公司;PhilipsTecnai10透射式電鏡購自Philips公司。
1.2 方法
1.2.1 噬菌體的分離純化
于山東省泰安市某鴨場(chǎng) 糞 池 采 集 糞 便 樣 品。將 采 集 到 的 樣 品 加 入15mL50mmol/LTris-HCl緩沖溶液，4 ℃靜置過夜。將樣品于12000r/min離心10～15min去除大部分固體雜質(zhì)，上清液經(jīng)0.22μm 微孔濾膜過濾除菌。取10mL過濾液加入10mL已滅菌 TSB培養(yǎng)基中，再按照1%接種量加入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宿主菌種子液，37 ℃、180r/min振 蕩培 養(yǎng) 過 夜，次 日 將培養(yǎng)液8000r/min離心15min，取1mL上清液加入10mLTSB培養(yǎng)基，并按照1%接種量接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宿主菌種子液，室溫靜置1h后于37 ℃振蕩培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后8000r/min離心15min，過濾，即得噬菌體原液。
用50mmol/LTris-HCl緩沖溶液對(duì)噬菌體原液進(jìn)行梯度稀釋，取合適梯度噬菌體稀釋液0.3mL與0.3mL宿主菌種子液混合，加入5mL 約55 ℃ TSB半固體培養(yǎng)基，混勻后倒入 TSA 平板上，平板凝固后倒置于37℃培養(yǎng)箱4～6h，觀察噬菌斑生長(zhǎng)情況。挑取直徑 大 且 透 亮 的 噬 菌 斑 于 Tris-HCl緩沖溶液，適當(dāng)稀釋后按照前述分離方法進(jìn)行純化，重復(fù)3～5次，直至噬菌斑形狀大小均勻。挑取單個(gè)噬菌斑至10mLTSB培養(yǎng)基，并按照1%接種量接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宿主菌液，37 ℃、180r/min振蕩培養(yǎng)過夜;離心過濾后即得純化的噬菌體裂解液，同時(shí)參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行噬菌體滴度測(cè)定[10]。
1.2.2 噬菌體電鏡觀察 參照文獻(xiàn)提供方法，采用PEG8000制備噬菌體顆粒濃縮液，取10μL濃縮液滴于銅網(wǎng) 上，自 然 沉 淀10min，用濾紙吸去側(cè)面多余液體，加1滴磷鎢酸至銅網(wǎng)上，染色10min，銅網(wǎng)干燥后用透射電鏡進(jìn)行觀察[11]。
1.2.3 基因組提取及核酸類型 確 定
利 用PEG8000制備噬菌體顆粒濃縮液，在濃縮液中加入DNaseⅠ、RNaseA，37 ℃孵育30min，采用微量病毒提取試劑盒提取噬菌體核酸。用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ、HindⅢ 對(duì)提取到的噬菌體核酸進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物用0.7%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè)，根據(jù)酶切圖譜鑒定噬菌體核酸類型。
1.2.4 噬菌體生物學(xué)特性分析
1.2.4.1 噬菌譜測(cè)定
測(cè)定該噬菌體對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保存的除宿主菌之外的其余10株大腸桿菌的宿主譜，10株大腸 桿 菌 于37 ℃、180r/min振 蕩培 養(yǎng)過夜，噬菌體過濾液及大腸桿菌菌液各取100μL，加入5mLTSB半固體培養(yǎng)基，混勻后倒入 TSA 平板上，凝固后倒置于37 ℃培養(yǎng)箱4～6h，觀察有無噬菌斑生長(zhǎng)。
1.2.4.2 最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)測(cè)定
將宿主菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，并進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。宿主菌按照培養(yǎng)基體積的1%加至滅菌的 TSB液體培養(yǎng)基中，噬菌 體 裂 解 液 按 照 感 染 復(fù) 數(shù) 為 0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001 加 入，37 ℃、180r/min振蕩培養(yǎng)3.5h，5000r/min離心15min，上清液經(jīng)0.22μm 微孔濾膜過濾除菌，梯度稀 釋 法 測(cè) 定 裂 解液滴度，以產(chǎn)生最高滴度的感染復(fù)數(shù)組作為該噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)。
1.2.4.3 一步生長(zhǎng)曲線
將噬菌體及對(duì)數(shù)生成長(zhǎng)期的宿主菌按照最佳感染復(fù)數(shù)加至100mLTSB液體培養(yǎng)基中，37 ℃振 蕩培 養(yǎng) 箱 靜 置 孵 育15min 后180r/min振蕩培養(yǎng)，每隔20min取樣，測(cè)定噬菌體滴度。以時(shí)間為橫坐標(biāo)、噬菌體滴度為縱坐標(biāo)繪制一步生長(zhǎng)曲線圖。通過下列公式計(jì)算噬菌體裂解量。
裂解量=裂解末期噬菌體滴度/裂解初 期 宿 主菌數(shù)
1.2.4.4 熱穩(wěn)定性測(cè)定
取1mL 噬菌體純培養(yǎng)液(109 PFU/mL)置于無菌 EP管內(nèi)，分別于40、50、60、70、80 ℃水浴中孵育1h 后，測(cè)定 噬 菌 體 滴度。以溫度為橫坐標(biāo)、噬菌體滴度為縱坐標(biāo)繪制溫度耐受性曲線圖。
1.2.4.5 酸堿穩(wěn)定性測(cè)定
取噬菌體純培養(yǎng)液(109 PFU/mL)按 照1:9的 比例 分 別 加 至 pH 為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0和12.0的 Tris-HCl緩沖溶液中，37℃水浴中孵育1h 后，測(cè)定噬菌體滴度。以pH 為橫坐標(biāo)、噬菌體滴度為縱坐標(biāo)，繪制酸堿耐受性曲線圖。
1.2.5 環(huán)境殺菌效果評(píng)估
1.2.5.1 液體殺菌效果評(píng)估
制備宿主菌菌懸液，離心、緩沖液重懸后獲得去培養(yǎng)基菌懸液，將菌懸液活菌數(shù)調(diào)整到2.0×105 CFU/mL，然后按體積比1:1加入相應(yīng)噬菌體(混勻后效價(jià)分別為在1.0× 104、1.0×105、1.0×106 PFU/mL 左右)，對(duì)照組加入等量 TSB培養(yǎng)基，25 ℃放置，分別在1和6h取樣，測(cè)定宿主菌活菌數(shù)。
1.2.5.2 載體(雞糞)殺菌效果評(píng)估
制備宿主菌菌懸液，稀釋 菌 液 濃 度 到4.0×106 CFU/mL，分別以體積比1:1加入濃度為4.0×105、4.0×106、4.0×107 PFU/mL的噬菌體，混勻后取1mL 混合液滴加于已高壓滅菌并烘干的10g雞糞中，攪拌均勻(使得雞糞含宿主菌為2.0×105 CFU/g;雞糞含噬菌 體 分 別 為 2.0×104、2.0×105 和 2.0× 106 PFU/g)，以加等量 TSB培養(yǎng)基為空白對(duì)照組，用玻璃 紙 密 封，于 25 ℃ 培 養(yǎng) 箱 放 置，分 別 在 5 和10h取樣，測(cè)定宿主菌活菌數(shù)。
1.2.6 統(tǒng)計(jì)分析
試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 Excel2010進(jìn)行初步處理后，采用 SPSS23.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-WayANOVA)，并 進(jìn)行 LSD 多 重比 較。結(jié)果 以 平 均 值 ± 標(biāo) 準(zhǔn) 差 表 示，P<0.05 表 示 差 異顯著。
2 結(jié) 果
2.1 噬菌體的分離純化
通過雙 層 平 板 法 分 離 純 化 出 1株 禽 大 腸 桿 菌(O2血清 型)噬 菌 體，命 名 為 ФECP2-1。該 噬菌 體在雙層平板 上 形 成 直 徑 1 mm 左 右圓 形 透 明 噬 菌斑，有較大暈圈(圖1)。
2.2 噬菌體電鏡觀察結(jié)果
在透射電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，該噬菌體具有正多面體的頭部和細(xì)而長(zhǎng)的尾部結(jié)構(gòu)，頭部直徑約98nm，尾部長(zhǎng)約123nm(圖2)，初步判定為肌尾科噬菌體。
2.3 基因組提取及核酸類型確定
由圖3可知，噬菌體 ФECP2-1可被限制性內(nèi)切酶切開，表 明 噬 菌 體 ФECP2-1 為 雙 鏈 DNA 噬 菌體。根據(jù)酶切結(jié)果預(yù)測(cè)其基因組大小約為29kb。
2.4 噬菌體生物學(xué)特性測(cè)定結(jié)果
2.4.1 噬菌譜測(cè)定結(jié)果
對(duì)除宿主菌之外其余10 株 大 腸 桿 菌 進(jìn) 行 宿 主 譜 測(cè) 定，發(fā) 現(xiàn) 噬 菌 體 ФECP2-1還能裂解 C8-0008、C8-0020、C8-0033、C8-0040、C8-0045、C8-0047、C8-0106、CVCC15688 株宿主菌(含與宿主 菌 不 同 血 清 型 菌 株)(表1)，表 明該噬菌體還可裂解自身血清型之外的其他大腸桿菌，具有較寬的裂解譜。
2.4.2 最佳感染復(fù)數(shù)測(cè)定結(jié)果
噬菌體 ФECP2-1在感染復(fù)數(shù)為0.00001時(shí)所產(chǎn)生的的子代噬菌體滴度最高，為1.66×1010 PFU/mL(圖4)，表明噬菌體 ФECP2-1最佳感染復(fù)數(shù)為0.00001。
2.4.3 一步生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果
通過一步生長(zhǎng)曲線測(cè)定發(fā)現(xiàn)，噬菌體 ФECP2-1感染宿主菌的潛伏期為20～40min，裂解時(shí)間為80～100min，120min后進(jìn)入平臺(tái) 期，噬 菌 體 最 高 滴 度 為6.20×1010 PFU/mL(圖5)，通 過 裂 解 量 公 式 得 出 該 噬 菌 體 裂 解 量 為4133PFU/cell。
2.4.4 熱穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果
由熱穩(wěn)定性曲線圖可知，噬菌體 ФECP2-1在40～50 ℃滴度變化不明顯，60℃處理1h，噬菌體滴度降低接近50%，60℃ 以上噬菌體滴度驟降，至80℃時(shí)基本降至0(圖6)。
2.4.5 酸堿穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果
噬菌體 ФECP2-1在 pH3.0～11.0范圍內(nèi)較穩(wěn)定。強(qiáng)酸、強(qiáng) 堿 都 會(huì)造成噬菌體活性 降 低。在 經(jīng) pH 為1.0及12.0緩沖液處理后，噬菌體 ФECP2-1完全失活(圖7)。
2.5 噬菌體 ФECP2-1環(huán)境殺菌效果評(píng)估
2.5.1 液體殺菌效果評(píng)估
由表2可知，在液體條件下，濃度為1.0×104～1.0×106 PFU/mL的噬菌體 ФECP2-1 對(duì) 濃度1.0×105 CFU/mL 的 宿主菌殺菌率均在99.9%以上，且殺菌率隨著噬菌體濃度的增加而 顯 著 增 加(P<0.05)，隨 作用 時(shí) 間 的 延長(zhǎng)殺菌率略有增加。說明該噬菌體在液體中具有較好的殺菌效果，可用于養(yǎng)殖環(huán)境中液體的消毒。
2.5.2 載體(雞糞)殺 菌 效 果 評(píng) 估 結(jié) 果
由 表3可知，濃度 為2.0×104 ～2.0×106 PFU/g 的 噬菌體 ФECP2-1 對(duì) 雞糞 中 濃 度 為2.0×105 CFU/g的宿主菌均具有 殺 菌 效 果，殺 菌 率 均 在99.0%以 上。殺菌率隨著噬菌體濃度的增加顯著增加 (P <0.05)，隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)殺菌率略有增加。說明該噬菌 體 針 對(duì) 雞 糞 中 的 宿 主 菌 也 具 有 一 定 的 殺 菌效果。
3 討 論
目前養(yǎng)殖業(yè)中關(guān)于禽大腸桿菌病的防控手段仍主要采用抗生素療法，但大腸桿菌極易對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性，進(jìn)而增強(qiáng)該菌的致病力，給養(yǎng)禽業(yè)帶來更大的經(jīng)濟(jì)損失[12]。針對(duì)細(xì)菌耐藥性問題，相關(guān)部門也出臺(tái)了一系列限抗禁抗政策，在這種情況下，尋求新的防控手段成為一種必然。噬菌體以其獨(dú)特的生物學(xué)特性及在防控細(xì)菌性疾病方面的巨大優(yōu)勢(shì)及潛力而備受關(guān)注[13]。
本研究以禽大腸桿菌 CVCC1552為宿主菌，從山東泰安某養(yǎng)鴨場(chǎng)糞污樣品中分離得到1株具有較寬 裂 解 譜 的 禽 大 腸 桿 菌 噬 菌 體，將 其 命 名 為 ФECP2-1。該噬菌體在雙層平板上形成的噬菌斑清晰、透亮，且在噬菌斑周圍形成較大的環(huán)形暈圈。暈圈的形成被認(rèn)為是由噬菌體產(chǎn)生的一種具有多糖降解能力的解聚酶降解噬菌斑周邊宿主菌多糖骨架而成。此外，暈圈的形成也被認(rèn)為是噬菌體具有莢膜水解酶活性的指示器。以上結(jié)果說明該噬菌體不僅可裂解宿主菌，還可降解細(xì)菌生物膜，具有較強(qiáng)的殺菌能力[14]。
通過透射電鏡觀察噬菌體 ФECP2-1具 有正 多面體的頭部和細(xì)而長(zhǎng)的尾部結(jié)構(gòu)，同時(shí)結(jié)合酶切鑒定結(jié)果，確定該噬菌體為雙鏈 DNA、肌尾科噬菌體，這與現(xiàn)有文獻(xiàn)[15-16]中報(bào)道的大腸桿菌噬菌體結(jié)構(gòu)特征基本一致。
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根據(jù)噬菌體裂解譜的寬窄可將噬菌體分為寬譜噬菌體和專一性噬菌體。自然界中大部分噬菌體專一性較強(qiáng)，只能特異性裂解某一細(xì)菌的某一血清型，但為了應(yīng)對(duì)當(dāng)前養(yǎng)殖行業(yè)中出現(xiàn)的病原菌混合感染，篩選寬譜噬菌體具有重要應(yīng)用價(jià)值[17]。噬菌體 ФECP2-1可裂解多種來源且不同血清型的大腸桿菌，裂解譜寬于吳圓圓等[18]報(bào)道的雞大腸桿菌噬菌體的裂解譜，說明該噬菌體可與多種細(xì)菌表面受體相結(jié)合進(jìn)而裂解細(xì)菌，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。
噬菌體 ФECP2-1最佳感染復(fù)數(shù)為0.00001，表明噬菌體對(duì)宿主菌 CVCC1552極度易感。潛伏期為20～40min，對(duì)宿主菌的裂解量為4133PFU/cell，遠(yuǎn)高于魏炳 棟 等[19]報(bào)道的大腸桿菌噬菌體裂解量370PFU/cell。說 明 該 噬 菌 體 具 有 較 強(qiáng) 的 裂 解 能力，適于投入生產(chǎn)使用，提高噬菌體的生產(chǎn)效率。
溫度和pH 的變化對(duì)噬菌體滴度也具有不同程度的影響。噬菌體 ФECP2-1的溫度及pH 穩(wěn)定性結(jié)果顯示，在60℃及以下溫度條件下噬菌體滴度相對(duì)穩(wěn)定，高 于 此 溫 度 則 滴 度 驟 降。這 一 結(jié) 果 與 楊 慧 敏等[20]報(bào)道的雞大腸桿菌噬菌體在60 ℃作用20min噬菌體全部失活不 同。說明本研究分離到的禽大腸桿菌噬菌體溫度耐受性更強(qiáng)，這一性能更有利于噬菌體制劑的商品化。噬菌體 ФECP2-1在pH3.0～11.0范圍內(nèi)滴度較穩(wěn)定，這一結(jié)果也優(yōu)于文獻(xiàn)報(bào)道的同類噬菌體的酸堿耐受范圍[21-22]。說明該噬菌體在不同的酸堿環(huán)境中均具有裂解細(xì)菌的能力，這一特性對(duì)于噬菌體作為環(huán)境消毒劑進(jìn)行開發(fā)具有重要意義。
O2血清型大腸桿菌是禽類常見的致病力較強(qiáng)且發(fā)病率較高的大腸桿菌血清型之一，可引起禽類的胸膜炎及 敗 血 癥[23]。在 實(shí)際生產(chǎn)中由于雜菌干擾、噬菌體施用及取樣不均勻等因素的存在，以致于無法對(duì)某一特異性噬菌體的真實(shí)殺菌效果進(jìn)行評(píng)估。本研究排除以上干擾因素的影響，較理想化的使用噬菌體 ФECP2-1針對(duì)處理過的養(yǎng) 殖 水 體 及 雞糞中宿主菌進(jìn)行防控，以最大程度的呈現(xiàn)噬菌體的真實(shí)殺菌效果。結(jié)果顯示噬菌體干預(yù)組液體及糞便大腸桿菌活菌數(shù)較初始均有明顯降低，殺菌率均在99%以上。其中 噬 菌 體 ФECP2-1針 對(duì)液 體 中 大 腸桿菌殺菌效果優(yōu)于對(duì)雞糞中大腸桿菌殺菌效果，這可能與2種基質(zhì)中噬菌體與宿主菌的接觸概率有一定關(guān)系，此外雞糞中有機(jī)質(zhì)對(duì)于噬菌體的殺菌效果也可能存在一定干擾。噬 菌 體 ФECP2-1對(duì) 雞糞 中大腸桿菌殺菌效果仍略優(yōu)于文獻(xiàn)中報(bào)道的殺菌效果[24]。綜上可知，噬菌體 ФECP2-1對(duì)于實(shí)驗(yàn)室模擬的養(yǎng)殖環(huán)境感染的大腸桿菌具有良好的防控效果。
4 結(jié) 論
本研究從養(yǎng)殖環(huán)境中分離篩選到1株禽大腸桿菌 O2血清型強(qiáng)裂解 性 噬 菌 體 ФECP2-1，屬 于肌 尾科噬菌體，具有較寬的裂解譜及良好的熱穩(wěn)定性、pH 耐受性。該噬菌體感染復(fù)數(shù)低、裂解量高，在模擬養(yǎng)殖環(huán)境中表現(xiàn)出較好的殺菌效果，是一株具有較好應(yīng)用前景的噬菌體。本研究為噬菌體類生物消毒劑的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)，為禽大腸桿菌病的防控提供了新的思路。——論文作者：李金敏1 ，高緒娜1，桑瑞新1，宮本芝2，徐海燕1，谷 巍1，郝木強(qiáng)1，蘭江華1，王 紅1
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