發(fā)布時(shí)間：2019-06-29所屬分類：農(nóng)業(yè)論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要：作者在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上篩選出5種(莖1、莖2、莖4、花2、姜4)對(duì)蘋果輪紋病菌菌絲有明顯抑制作用的內(nèi)生細(xì)菌，并通過與蘋果輪紋病的對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)，對(duì)其進(jìn)一步的篩
摘要：作者在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上篩選出5種(莖1、莖2、莖4、花2、姜4)對(duì)蘋果輪紋病菌菌絲有明顯抑制作用的內(nèi)生細(xì)菌，并通過與蘋果輪紋病的對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)，對(duì)其進(jìn)一步的篩選。結(jié)果表明，對(duì)蘋果輪紋病菌菌絲生長(zhǎng)抑制效果最好的為從黃頂菊內(nèi)分離出的花2，其次為從姜內(nèi)分離的姜4和從黃頂菊內(nèi)分離的莖2，抑制效果最差的則為從黃頂菊內(nèi)分離的莖1。
關(guān)鍵詞：蘋果輪紋病;內(nèi)生細(xì)菌;生物防治
蘋果是我國主栽的經(jīng)濟(jì)作物之一。隨著蘋果種植面積的不斷擴(kuò)大，蘋果輪紋病的危害日益嚴(yán)重，我國山東、遼寧、河北等地區(qū)均有發(fā)生，極大地影響果品產(chǎn)量和質(zhì)量，造成重大的經(jīng)濟(jì)損失。蘋果輪紋病一旦發(fā)生，輕則削弱樹勢(shì)，重則導(dǎo)致枯枝、死樹。據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國蘋果果園總體發(fā)病率在70%以上，一般年份蘋果產(chǎn)量損失20%～30%，多雨年份則達(dá)到40%～60%[1]。
目前對(duì)蘋果輪紋病的防治主要是化學(xué)防治。化學(xué)農(nóng)藥雖然有見效快、使用方便、可大規(guī)模應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)，但容易對(duì)環(huán)境造成污染和殘留在果品上，危害人類的健康。此外，化學(xué)藥劑的大量使用還會(huì)誘導(dǎo)病菌產(chǎn)生抗藥性。因此，采取一種高效、無毒、無污染的防治策略將成為研究防治蘋果輪紋病的重中之重[2]。生物防治是指利用拮抗性微生物而降低有害生物的作用，使其有益于有益生物[3]。
拮抗微生物的拮抗機(jī)制主要通過生防細(xì)菌產(chǎn)生抗生素、微生物之間的競(jìng)爭(zhēng)作用及誘發(fā)植物自身的抗病性這3種方式發(fā)揮拮抗植物病害的作用。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，利用熒光假單胞桿菌(Pseudomonasfluoreseus)防治小麥全蝕病[4]，利用枯草芽孢桿菌B903抑制蘋果輪紋病菌菌絲的擴(kuò)散[5]。生物防治無殘留、無污染，對(duì)人和牲畜都沒有傷害，且能夠不傷害天敵和有益生物，保護(hù)自然生態(tài)平衡。植物內(nèi)生菌作為一種天然生防菌，對(duì)于防治植物病害具有重要的意義[6]，有很大的開發(fā)應(yīng)用前景，是值得人們努力研究探索的一個(gè)方向。
目前雖然國內(nèi)外對(duì)植物內(nèi)生菌的研究報(bào)道很多，但是利用微生物資源防治蘋果輪紋病的研究報(bào)道還很少。本文主要以蘋果的真菌病害為主要研究對(duì)象，利用對(duì)峙試驗(yàn)的方法，從黃頂菊分離出來的花2、莖1、莖2、莖4及從姜內(nèi)分離出的姜4，共5種內(nèi)生細(xì)菌，從中篩選出對(duì)蘋果輪紋病具有廣譜拮抗能力的細(xì)菌，為開發(fā)綠色、高效、安全的新型微生物殺菌劑提供基礎(chǔ)。
1材料與方法
5種拮抗細(xì)菌如上述。蘋果輪紋病病菌由衡水學(xué)院生命科學(xué)系園林植物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。
1.15種內(nèi)生細(xì)菌的活化
從冰箱中取出保存?zhèn)溆玫?種內(nèi)生菌(莖1、莖2、莖4、花2、姜4)，在無菌操作臺(tái)酒精燈周圍，將接種環(huán)放在酒精燈火焰上方灼燒至通紅，待其冷卻后將接種環(huán)深入細(xì)菌培養(yǎng)皿，輕輕挑取細(xì)菌劃線到新的NA固體平板上培養(yǎng)，每種細(xì)菌重復(fù)3次。接種后，將其放置到28℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~5d。
1.2蘋果輪紋病菌的復(fù)壯
首先需要對(duì)保存在低溫環(huán)境中的蘋果輪紋病菌進(jìn)行活化。在超凈工作臺(tái)上，首先用火柴點(diǎn)燃酒精燈，在酒精燈外焰上灼燒打孔器，待打孔器冷卻，在酒精燈周圍用打孔器在培養(yǎng)皿邊緣打出直徑為1cm的菌餅，然后將菌餅置入PDA固體培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿置于28℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~5d，觀察病原菌的生長(zhǎng)情況。
1.3蘋果輪紋病病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制試驗(yàn)
細(xì)菌菌懸液的制備：在無菌操作臺(tái)上的酒精燈周圍，往培養(yǎng)好的細(xì)菌培養(yǎng)皿中注入適量無菌水，用玻璃棒輕輕刮取細(xì)菌，使其混在無菌水中，并用移液槍吸取，將其轉(zhuǎn)移至三角瓶中，密封。將三角瓶放置到振蕩器振蕩1min，使細(xì)菌與水混合均勻。
再用移液槍吸取振蕩好的菌懸液，滴入比色杯中，再將比色杯放入722分光光度計(jì)中，測(cè)定其OD值，并不斷調(diào)整濃度，使其最終的OD值為1.000。密封備用。對(duì)峙培養(yǎng)：用酒精燈外焰灼燒打孔器滅菌，待打孔器冷卻后，在超凈工作臺(tái)上的酒精燈周圍，用直徑為1cm的打孔器在活化后的蘋果輪紋病培養(yǎng)基上打孔，挑取菌餅倒扣在新的PDA平板上。在平板的外圍分別均勻放置3個(gè)濾紙片，打開裝有菌懸液的三角瓶，用移液槍吸取制備好的細(xì)菌菌懸液50μL，分3次將其滴在濾紙片上，每種細(xì)菌重復(fù)3次。同時(shí)用無菌水作對(duì)照。將所有的PDA平板置于28℃的恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~5d。
1.4抑菌圈直徑的測(cè)定
5種內(nèi)生細(xì)菌與蘋果輪紋病病菌進(jìn)行對(duì)峙培養(yǎng)試驗(yàn)，對(duì)蘋果輪紋病病菌進(jìn)行拮抗測(cè)定。測(cè)定蘋果輪紋病病菌菌落直徑，計(jì)算抑菌效果。用Excel軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和作圖，用Spss17.0進(jìn)行方差分析，差異顯著性水平位5%(p≤0.05)。
2結(jié)果與分析，5種內(nèi)生細(xì)菌對(duì)蘋果輪紋病菌均有抑制作用，其中從黃頂菊花內(nèi)分離的花2對(duì)病原菌的拮抗性最大，抑制效果最好;從姜內(nèi)分離的姜4和從黃頂菊內(nèi)分離的莖2次之;抑制效果最差的則是從黃頂菊內(nèi)分離的莖1。
平均抑菌率依次為55.026%、46.032%、44.444%、34.391%、26.455%前三者間差異不顯著，但顯著高于后二者;后二者間差異不顯著。
3小結(jié)與設(shè)想
植物病害的生物防治相較化學(xué)防治具有無與倫比的優(yōu)勢(shì)，已成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)。但植物內(nèi)生菌作為生防因子應(yīng)用的潛力還未完全開發(fā)出來，多數(shù)生防制劑的效果還不能令人滿意。本試驗(yàn)研究表明，花2、莖2和姜4對(duì)蘋果輪紋病菌菌絲具有良好的拮抗作用，這為進(jìn)一步研究防治蘋果輪紋病的有效生物制劑奠定了基礎(chǔ)。今后要對(duì)蘋果輪紋病菌菌絲拮抗效果好的內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)和生物學(xué)上的鑒定，同時(shí)分析黃頂菊和姜內(nèi)分離的內(nèi)生細(xì)菌起拮抗作用的成分，并研究其拮抗機(jī)理。
參考文獻(xiàn)：
[1]范昆，付麗，張勇，等.10種殺菌劑對(duì)蘋果輪紋病菌的室內(nèi)毒力及田間防治效果研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，28(10)：32-35.
[2]王海明，鄧德法，王惠玉.淺談生物防治技術(shù)在蘋果病害防治中的應(yīng)用[J].落葉果樹，2014，46(2)：22-23.
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