發(fā)布時(shí)間：2020-01-02所屬分類(lèi)：醫(yī)學(xué)論文瀏覽：1次
摘 要： 摘要：目的：建立HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量。方法：采用Agilent5TC-C18色譜柱(4.6mm250mm，5m)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)294nm，檢測(cè)柱溫30℃。結(jié)果：和厚樸酚、厚樸酚的進(jìn)樣濃度分別
摘要：目的：建立HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量。方法：采用Agilent5TC-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)294nm，檢測(cè)柱溫30℃。結(jié)果：和厚樸酚、厚樸酚的進(jìn)樣濃度分別在13.00~208.00g/L(r=0.99995)和26.23~419.68g/L(r=0.99996)呈良好線性關(guān)系;和厚樸酚、厚樸酚的平均回收率(n=6)分別為98.58%(RSD%=2.29)、101.29%(RSD%=1.75);5個(gè)批次復(fù)方藿香丸樣品中和厚樸酚、厚樸酚的含量測(cè)定結(jié)果分別為3.41~12.26mg/袋、8.59~14.42mg/袋。結(jié)論：建立的HPLC法可用于復(fù)方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量測(cè)定。
關(guān)鍵詞：復(fù)方藿香丸;厚樸酚;和厚樸酚;含量測(cè)定
復(fù)方藿香丸為萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院的醫(yī)院制劑，由廣藿香、厚樸(姜制)、陳皮、紫蘇葉、白芷、白術(shù)(炒)、姜半夏、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、生姜、大棗等13味中藥組成，具有解表化濕，理氣和中之功效，主要用于外感風(fēng)寒，內(nèi)傷濕滯，頭痛昏重，脘腹脹痛，嘔吐泄瀉，胃腸型感冒。厚樸是臨床常用中藥，來(lái)源于木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.etWils.或凹葉厚樸MagnoliaoffinalisRehd.etWils.var.bilobaRehd.etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮，具燥濕消痰，下氣除滿之功效[1]。處方中厚樸作為臣藥，加強(qiáng)君藥廣藿香解表化濕的功效。其主要有效成分為和厚樸酚、厚樸酚[2-5]。研究表明，厚樸酚與和厚樸酚均有抗腹瀉作用[6-7]。目前復(fù)方藿香丸收錄于2007年版《江西省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)》，主要質(zhì)控項(xiàng)目?jī)H為“性狀”“薄層鑒別”兩個(gè)項(xiàng)目，尚未有復(fù)方藿香丸中活性成分的含量測(cè)定方法。隨著國(guó)家對(duì)醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)的提高和規(guī)范化管理的加強(qiáng)[8]，為了更全面的對(duì)復(fù)方藿香丸進(jìn)行質(zhì)量控制，因此本文建立了復(fù)方藿香丸中厚樸的HPLC含量測(cè)定方法，以厚樸酚與和厚樸酚為指標(biāo)性成分，以期為控制和提高復(fù)方藿香丸的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。
1材料
1.1試藥復(fù)方藿香丸(規(guī)格每袋9克)均由萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院提供;厚樸酚(98.8%，批號(hào)110729-201513)、和厚樸酚(100%，批號(hào)110730-201614)對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;甲醇、乙腈(HPLC級(jí)，購(gòu)于北京百靈威科技有限公司);水為娃哈哈水，其他試劑均為分析純。
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1.2儀器Agilent1200高效液相色譜儀，包括Agilent1200柱溫箱、DAD檢測(cè)器、Agilent1200色譜工作站。ME-204(萬(wàn)分之一天平，梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司);電子分析天平CP225D(十萬(wàn)分之一，德國(guó)Satorius科學(xué)儀器有限公司);酸度計(jì)(德國(guó)Satorius科學(xué)儀器有限公司)。
2方法與結(jié)果
2.1溶液制備
2.1.1混合對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備分別精密稱(chēng)取和厚樸酚、厚樸酚對(duì)照品適量，置同一25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得含和厚樸酚520.00g/L、厚樸酚1049.20g/L的混合儲(chǔ)備溶液。
2.1.2供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，研細(xì)，取約2g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，稱(chēng)定重量，超聲(500W，40KHz)處理30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
2.1.3陰性樣品溶液的制備按工藝方法制備缺少厚樸的陰性樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法操作，制成陰性樣品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果表明：陰性樣品的HPLC圖譜中，無(wú)呈現(xiàn)與厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰，見(jiàn)圖1。
2.2色譜條件色譜柱為Agilent5TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動(dòng)相，檢測(cè)流速為1.0mL/min，波長(zhǎng)294nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量10μL，在上述色譜條件下，和厚樸酚、厚樸酚與其他組分的色譜峰分離度良好。對(duì)照品、樣品及陰性樣品色譜圖見(jiàn)圖1。
2.3方法學(xué)考察
2.3.1線性關(guān)系考察精密吸取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，加甲醇逐級(jí)稀釋得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，含厚樸酚分別為26.23，52.46，104.92，209.84，419.68g/L;含和厚樸酚分別為13.00，26.00，52.00，104.00，208.00g/L。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10μL注入液相色譜儀，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以對(duì)照品的進(jìn)樣濃度(g/L)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得厚樸酚回歸方程：Y=13.94014X+6.27638，r=0.99996;和厚樸酚回歸方程：Y=15.32088X+3.53886，r=0.99995。結(jié)果表明厚樸酚進(jìn)樣濃度在26.23~419.68g/L呈良好線性關(guān)系;和厚樸酚進(jìn)樣濃度在13.00~208.00g/L呈良好線性關(guān)系。
2.3.2精密度試驗(yàn)精密吸取混合對(duì)照品溶液(和厚樸酚52.00g/L、厚樸酚104.92g/L)10μL，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。和厚樸酚峰面積的RSD為0.52%;厚樸酚峰面積的RSD為0.43%。結(jié)果表明精密度良好。
2.3.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、10、12h精密吸取10μL進(jìn)樣，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定厚樸酚與和厚樸酚的峰面積，測(cè)得和厚樸酚峰面積的RSD為0.92%;厚樸酚峰面積的RSD為0.77%。結(jié)果表明供試品溶液在室溫下12h內(nèi)穩(wěn)定。
2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(20150402)樣品六份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算和厚樸酚與厚樸酚的含量(mg/袋)。結(jié)果計(jì)算得和厚樸酚含量的RSD為1.82%;厚樸酚含量的RSD為0.84%;表明該方法重現(xiàn)性良好。
2.3.5加樣回收率試驗(yàn)取已知含量(和厚樸酚：7.1565mg/袋;厚樸酚：14.4420mg/袋)的復(fù)方藿香丸樣品，研細(xì)，取約1g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別加入適量和厚樸酚與厚樸酚混合對(duì)照儲(chǔ)備液，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率(n=6)，結(jié)果表明和厚樸酚與厚樸酚的平均回收率分別為98.58%、101.29%，RSD分別為2.29%、1.75%，結(jié)果見(jiàn)表1-2。
2.3.6耐用性試驗(yàn)取同一批號(hào)(20170705)樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別采用Agilent5TC-C18(4.6mm×250mm，5μm)、SepaxAmethystC18-H(4.6mm×250mm，5μm)、WelchUltimateXB-C18(4.6mm×250mm，5μm)3種品牌的色譜柱，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果無(wú)明顯差別。
2.4樣品測(cè)定取不同批號(hào)復(fù)方藿香丸樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備項(xiàng)下制備供試液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見(jiàn)表3。
3討論
3.1色譜條件的選擇經(jīng)DAD檢測(cè)器掃描和厚樸酚、厚樸酚對(duì)照品，結(jié)果顯示和厚樸酚的最大吸收波長(zhǎng)為294nm，厚樸酚的最大吸收波長(zhǎng)為292nm，綜合考慮選擇294m作為檢測(cè)波長(zhǎng)。在流動(dòng)相的選擇中，由于復(fù)方藿香丸中含十三味中藥，成分復(fù)雜，本文嘗試參考《中國(guó)藥典》2015年版一部厚樸含量測(cè)定項(xiàng)下流動(dòng)相甲醇-水(78∶22)，結(jié)果和厚樸酚的分離度達(dá)不到要求。后嘗試乙腈-水(40∶60)、乙腈-0.1%磷酸(45∶55)，結(jié)果顯示和厚樸酚的分離度均達(dá)不到要求。而甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)系統(tǒng)分離效果好，峰形最佳，故選擇甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動(dòng)相。
3.2提取方法及時(shí)間的考察提取條件采用超聲提取法分別考察了甲醇、50%甲醇、稀乙醇三種提取溶劑，結(jié)果表明甲醇提取效率最高。在此基礎(chǔ)上，分別考察了超聲和回流2種提取方式，結(jié)果超聲與回流提取效率相當(dāng)，故選用提取簡(jiǎn)單的超聲提取方式。同時(shí)對(duì)甲醇溶液用量10、25、50mL，以及超聲時(shí)間15、30，60min進(jìn)行考察，最后確定采用甲醇超聲(500W，40KHz)處理30min為宜。
3.3小結(jié)
從對(duì)5批復(fù)方藿香丸樣品中和厚樸酚與厚樸酚的含量測(cè)定結(jié)果來(lái)看，和厚樸酚與厚樸酚含量相差較大，提示厚樸原藥材的質(zhì)量存在差別，為避免由原藥材引起中成藥的療效差異，保障人民用藥的安全有效，因此有必要對(duì)厚樸進(jìn)行質(zhì)量控制。本文建立了同時(shí)測(cè)定復(fù)方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚含量的HPLC方法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法準(zhǔn)確、快速，操作簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方藿香丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)。
