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摘 要： 摘要：目的：建立HPLC法同時測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量。方法：采用Agilent5TC-C18色譜柱(4.6mm250mm，5m)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長294nm，檢測柱溫30℃。結果：和厚樸酚、厚樸酚的進樣濃度分別
摘要：目的：建立HPLC法同時測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量。方法：采用Agilent5TC-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長294nm，檢測柱溫30℃。結果：和厚樸酚、厚樸酚的進樣濃度分別在13.00~208.00g/L(r=0.99995)和26.23~419.68g/L(r=0.99996)呈良好線性關系;和厚樸酚、厚樸酚的平均回收率(n=6)分別為98.58%(RSD%=2.29)、101.29%(RSD%=1.75);5個批次復方藿香丸樣品中和厚樸酚、厚樸酚的含量測定結果分別為3.41~12.26mg/袋、8.59~14.42mg/袋。結論：建立的HPLC法可用于復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量測定。
關鍵詞：復方藿香丸;厚樸酚;和厚樸酚;含量測定
復方藿香丸為萍鄉市中醫院的醫院制劑，由廣藿香、厚樸(姜制)、陳皮、紫蘇葉、白芷、白術(炒)、姜半夏、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、生姜、大棗等13味中藥組成，具有解表化濕，理氣和中之功效，主要用于外感風寒，內傷濕滯，頭痛昏重，脘腹脹痛，嘔吐泄瀉，胃腸型感冒。厚樸是臨床常用中藥，來源于木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.etWils.或凹葉厚樸MagnoliaoffinalisRehd.etWils.var.bilobaRehd.etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮，具燥濕消痰，下氣除滿之功效[1]。處方中厚樸作為臣藥，加強君藥廣藿香解表化濕的功效。其主要有效成分為和厚樸酚、厚樸酚[2-5]。研究表明，厚樸酚與和厚樸酚均有抗腹瀉作用[6-7]。目前復方藿香丸收錄于2007年版《江西省食品藥品監督管理局醫療機構制劑標準》，主要質控項目僅為“性狀”“薄層鑒別”兩個項目，尚未有復方藿香丸中活性成分的含量測定方法。隨著國家對醫院制劑標準的提高和規范化管理的加強[8]，為了更全面的對復方藿香丸進行質量控制，因此本文建立了復方藿香丸中厚樸的HPLC含量測定方法，以厚樸酚與和厚樸酚為指標性成分，以期為控制和提高復方藿香丸的質量提供科學依據。
1材料
1.1試藥復方藿香丸(規格每袋9克)均由萍鄉市中醫院提供;厚樸酚(98.8%，批號110729-201513)、和厚樸酚(100%，批號110730-201614)對照品購于中國食品藥品檢定研究院;甲醇、乙腈(HPLC級，購于北京百靈威科技有限公司);水為娃哈哈水，其他試劑均為分析純。
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1.2儀器Agilent1200高效液相色譜儀，包括Agilent1200柱溫箱、DAD檢測器、Agilent1200色譜工作站。ME-204(萬分之一天平，梅特勒-托利多國際貿易(上海)有限公司);電子分析天平CP225D(十萬分之一，德國Satorius科學儀器有限公司);酸度計(德國Satorius科學儀器有限公司)。
2方法與結果
2.1溶液制備
2.1.1混合對照品儲備液的制備分別精密稱取和厚樸酚、厚樸酚對照品適量，置同一25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得含和厚樸酚520.00g/L、厚樸酚1049.20g/L的混合儲備溶液。
2.1.2供試品溶液的制備取裝量差異項下內容物，研細，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，稱定重量，超聲(500W，40KHz)處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.1.3陰性樣品溶液的制備按工藝方法制備缺少厚樸的陰性樣品，按“2.1.2”項下方法操作，制成陰性樣品溶液，依法測定，結果表明：陰性樣品的HPLC圖譜中，無呈現與厚樸酚、和厚樸酚對照品保留時間相同的色譜峰，見圖1。
2.2色譜條件色譜柱為Agilent5TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相，檢測流速為1.0mL/min，波長294nm，柱溫30℃，進樣量10μL，在上述色譜條件下，和厚樸酚、厚樸酚與其他組分的色譜峰分離度良好。對照品、樣品及陰性樣品色譜圖見圖1。
2.3方法學考察
2.3.1線性關系考察精密吸取上述混合對照品儲備液，加甲醇逐級稀釋得系列標準溶液，含厚樸酚分別為26.23，52.46，104.92，209.84，419.68g/L;含和厚樸酚分別為13.00，26.00，52.00，104.00，208.00g/L。分別精密吸取上述對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，按“2.2”項下色譜條件測定，以對照品的進樣濃度(g/L)為橫坐標(X)，峰面積積分值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得厚樸酚回歸方程：Y=13.94014X+6.27638，r=0.99996;和厚樸酚回歸方程：Y=15.32088X+3.53886，r=0.99995。結果表明厚樸酚進樣濃度在26.23~419.68g/L呈良好線性關系;和厚樸酚進樣濃度在13.00~208.00g/L呈良好線性關系。
2.3.2精密度試驗精密吸取混合對照品溶液(和厚樸酚52.00g/L、厚樸酚104.92g/L)10μL，按“2.2”項下色譜條件連續進樣6次，測定峰面積。和厚樸酚峰面積的RSD為0.52%;厚樸酚峰面積的RSD為0.43%。結果表明精密度良好。
2.3.3穩定性實驗取同一份供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、10、12h精密吸取10μL進樣，按“2.2”項下色譜條件，測定厚樸酚與和厚樸酚的峰面積，測得和厚樸酚峰面積的RSD為0.92%;厚樸酚峰面積的RSD為0.77%。結果表明供試品溶液在室溫下12h內穩定。
2.3.4重復性試驗取同一批號(20150402)樣品六份，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，計算和厚樸酚與厚樸酚的含量(mg/袋)。結果計算得和厚樸酚含量的RSD為1.82%;厚樸酚含量的RSD為0.84%;表明該方法重現性良好。
2.3.5加樣回收率試驗取已知含量(和厚樸酚：7.1565mg/袋;厚樸酚：14.4420mg/袋)的復方藿香丸樣品，研細，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入適量和厚樸酚與厚樸酚混合對照儲備液，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定含量，計算加樣回收率(n=6)，結果表明和厚樸酚與厚樸酚的平均回收率分別為98.58%、101.29%，RSD分別為2.29%、1.75%，結果見表1-2。
2.3.6耐用性試驗取同一批號(20170705)樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別采用Agilent5TC-C18(4.6mm×250mm，5μm)、SepaxAmethystC18-H(4.6mm×250mm，5μm)、WelchUltimateXB-C18(4.6mm×250mm，5μm)3種品牌的色譜柱，按“2.2”項下色譜條件測定，結果無明顯差別。
2.4樣品測定取不同批號復方藿香丸樣品，按“2.1.2”項下供試品溶液的制備項下制備供試液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，測定，即得。結果見表3。
3討論
3.1色譜條件的選擇經DAD檢測器掃描和厚樸酚、厚樸酚對照品，結果顯示和厚樸酚的最大吸收波長為294nm，厚樸酚的最大吸收波長為292nm，綜合考慮選擇294m作為檢測波長。在流動相的選擇中，由于復方藿香丸中含十三味中藥，成分復雜，本文嘗試參考《中國藥典》2015年版一部厚樸含量測定項下流動相甲醇-水(78∶22)，結果和厚樸酚的分離度達不到要求。后嘗試乙腈-水(40∶60)、乙腈-0.1%磷酸(45∶55)，結果顯示和厚樸酚的分離度均達不到要求。而甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)系統分離效果好，峰形最佳，故選擇甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相。
3.2提取方法及時間的考察提取條件采用超聲提取法分別考察了甲醇、50%甲醇、稀乙醇三種提取溶劑，結果表明甲醇提取效率最高。在此基礎上，分別考察了超聲和回流2種提取方式，結果超聲與回流提取效率相當，故選用提取簡單的超聲提取方式。同時對甲醇溶液用量10、25、50mL，以及超聲時間15、30，60min進行考察，最后確定采用甲醇超聲(500W，40KHz)處理30min為宜。
3.3小結
從對5批復方藿香丸樣品中和厚樸酚與厚樸酚的含量測定結果來看，和厚樸酚與厚樸酚含量相差較大，提示厚樸原藥材的質量存在差別，為避免由原藥材引起中成藥的療效差異，保障人民用藥的安全有效，因此有必要對厚樸進行質量控制。本文建立了同時測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚含量的HPLC方法，經方法學驗證，該方法準確、快速，操作簡便，專屬性強，重現性好，可用于復方藿香丸的質量評價。
