發(fā)布時(shí)間：2020-04-07所屬分類：醫(yī)學(xué)職稱論文瀏覽：1次
摘 要： [摘 要] 目的：比較膝骨關(guān)節(jié)炎患者與正常人血清蛋白質(zhì)組的差異 ，篩選其能用于骨關(guān)節(jié)炎診斷、治療或發(fā)病機(jī)制研究的血清生物學(xué)標(biāo)志物。方法：利用雙向熒光差異凝膠電泳技術(shù)比較膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清(4例)與健康志愿者血清(4例)蛋白圖譜的差異，使用基質(zhì)輔助激光
[摘 要] 目的：比較膝骨關(guān)節(jié)炎患者與正常人血清蛋白質(zhì)組的差異 ，篩選其能用于骨關(guān)節(jié)炎診斷、治療或發(fā)病機(jī)制研究的血清生物學(xué)標(biāo)志物。方法：利用雙向熒光差異凝膠電泳技術(shù)比較膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清(4例)與健康志愿者血清(4例)蛋白圖譜的差異，使用基質(zhì)輔助激光解吸電離 一飛行時(shí)間質(zhì)譜及生物信息學(xué)相關(guān)技術(shù)對(duì)獲得的差異蛋白進(jìn)行鑒定和初步分析，并用 Westernblotting進(jìn)一步驗(yàn)證所鑒定的蛋白。結(jié)果：成功建立了骨關(guān)節(jié)炎血清差異蛋白質(zhì)組學(xué)的研究方法;通過質(zhì)譜分析初步鑒定出 8個(gè)差異蛋白，其中5個(gè)蛋白在膝骨關(guān)節(jié)炎組表達(dá)上調(diào)， 3個(gè)蛋 白在膝骨關(guān)節(jié)炎組表達(dá)下 調(diào)。Western blotting進(jìn)一步驗(yàn)證 得到 儀 一巨球蛋 白在膝骨 關(guān)節(jié) 炎組表 達(dá)上調(diào) ，與雙向熒光膠內(nèi)差異凝膠電泳技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜分析的結(jié)果一致。結(jié)論 ：膝骨關(guān)節(jié)炎患者血清與正常人血清蛋 白表達(dá)存在明顯差異，其中僅：一巨球蛋白可作為骨關(guān)節(jié)炎潛在的疾病相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物進(jìn)一步研究，為骨關(guān)節(jié)炎的診斷、治療和發(fā)病機(jī)制的研究提供新的線索和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[關(guān)鍵詞] 骨關(guān)節(jié)炎 ;血清;生物學(xué)標(biāo)記物;雙向熒光差異凝膠電泳
骨關(guān)節(jié)炎 (osteoarthritis，OA)是由于機(jī)械和生物性因素共同作用所 導(dǎo)致 的關(guān)節(jié) 軟骨細(xì)胞 、細(xì)胞 外基質(zhì) 、軟骨下骨合成 和降解 動(dòng)態(tài)失衡所致 的全關(guān)節(jié)疾病…。OA以中老年患者多見 ，且女性 多于男性 ，60 歲 以上人 群患病率 可達(dá) 50% ，75歲 以上人 群則 達(dá) 80% ，該病的致殘率可高達(dá) 53% ，好發(fā) 于負(fù)重大 、活動(dòng)多的關(guān)節(jié) ，如膝 、脊柱 、髖 、踝 、手等關(guān)節(jié)-2J。發(fā)展到中晚期的 OA往往需要手術(shù)來減輕疼痛 、矯正畸形和改善關(guān)節(jié)功能 ，但手術(shù)不僅 給患者帶來沉重 的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān) ，也不能很好地解 決關(guān)節(jié) 軟骨的修復(fù) 和重建問題。然而 OA的發(fā)病機(jī)制 目前 尚不明確 ，缺乏有效的生物學(xué)標(biāo) 志物及早期診斷 和治療 的方法 ，因此采取新 的方法和手段 闡明 OA的發(fā)病機(jī)制 ，發(fā)現(xiàn)新的疾病診斷標(biāo)志物對(duì)提高 OA患者的生活質(zhì)量有重要意義。蛋 白質(zhì)組學(xué)是后基 因組時(shí)代 的一 門新興科 學(xué) ，是對(duì)生物體在蛋 白質(zhì)水平上定量、動(dòng)態(tài) 、整體性 的研究 ，同時(shí)也能 為闡明眾多疾病 的發(fā)病機(jī) 制提供理論根據(jù)和解決途徑。本研究采用雙 向熒光差異凝膠電泳 (two—dimensionalfluorescencedifferencegelelec— trophoresis，2D—DIGE)聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解吸電離一 飛行 時(shí) 間質(zhì) 譜 (matrix—assistedlaserdesorption ionization time一0f—flightmass spectrometry. MALDI — TOF—MS)，成功建立了 OA血清差異蛋 白質(zhì)組學(xué)的研究方法 ，通過對(duì)篩選 出的差異蛋 白的進(jìn)一 步研究 ，為發(fā)現(xiàn)新的診斷標(biāo)記物和藥物治療靶點(diǎn) ，以及發(fā)病機(jī)制的研究提供重要線索。
材 料 和 方 法
1 材 料和 儀器
1.1 主要試劑 十二烷基硫酸鈉 、二 硫蘇糖醇 、過硫酸銨 、丙烯酰胺 、N，N’～亞甲基丙烯酰胺 、四甲基乙二胺 、甘氨酸等均購(gòu) 自 Sigma;去血清高峰度蛋 白試劑盒 ProteoExtractAlbumin/IgG RemovalKit購(gòu) 自 Merck;蛋白質(zhì)純化試劑盒 Clean—upKit、蛋 白定量試劑盒 2DQuantKit、熒光標(biāo)記試 劑盒 CyDyeDIGE FluorLabelingKit、固相 pH值于膠條、IPGbuffer等均購(gòu) 自 GE， 2一巨球 蛋 白 (僅2一macroglobulin，僅2M; ab36995)I抗購(gòu) 自Abcam，I1抗購(gòu) 自Jackson。
1.2 主要儀 器和設(shè)備 IPGphor等 電聚焦儀、Ettan DALTsix垂直電泳系統(tǒng)、Typhoon9400型多功能激光掃描儀、DIGE分析軟件 DeCyder6.0和全 自動(dòng)斑點(diǎn)工作站 EttanSpotHandingWorkstation均為 GE產(chǎn)品，質(zhì)譜儀 UltraflexIII為布魯克產(chǎn)品;電泳凝膠成像分析系統(tǒng) Tanon一2500為上海天能科技有限公司產(chǎn)品。
2 方法
2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì) 象 從 中山大學(xué) 附屬第三 醫(yī)院骨科住院治療的 30例診斷 明確膝骨關(guān)節(jié)炎 患者 中隨機(jī)抽取 4例組成本研究 的 OA實(shí)驗(yàn)組 ，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)組挑選年齡 、性別 和體重指數(shù) (bodymassindex，BMI)分別對(duì)應(yīng)匹配的 4例健康 志愿者組成本研究 的對(duì) 照組 。本實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的獲取均 已征得入組 人員 的同意 ，符合相關(guān)衛(wèi)生部門的倫理委員會(huì)原則 。
實(shí)驗(yàn)組需滿足的條件 ：(1)診斷明確的骨關(guān)節(jié)炎患者 ：臨床 診 斷 參 照 2007年 《骨 關(guān) 節(jié) 炎 診 療 指南》 ;(2)無類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等結(jié)締組織病 ;(3)無肝腎功能不 良，免疫系統(tǒng)疾病 ;(4)抽血前 1周 內(nèi)未曾使用過非甾體類鎮(zhèn)痛藥 、糖皮質(zhì)激素等 ;(5)無藥 · 885 · 物過敏史 ;(6)非孕婦 、哺乳期 、月經(jīng)期婦 女;(7)既往無關(guān)節(jié)感染 、結(jié)核 、關(guān)節(jié)創(chuàng)傷手術(shù)史。對(duì)照組需滿足的條件 ：無包括骨關(guān)節(jié)炎在 內(nèi)的關(guān)節(jié)疾病 的現(xiàn)病史和既往史 。
2.2 樣品 實(shí)驗(yàn)前處理 所有血 清樣本取清晨空腹靜脈血 3mL，室溫下靜置 1h，4oC、2500×g離心 15 min取上清 ，用 0.2mLEP管 分裝 ，一80℃保 存?zhèn)溆?。集 齊血清樣本后 ，用 ProteoExtractAlbumin/IgG RemovalKit試劑盒去 除高豐度蛋 白，然后對(duì)樣本進(jìn)行純化和定量 ，隨后按熒 光標(biāo) 記試 劑盒說明書對(duì)蛋白樣品進(jìn)行 CyDye熒光標(biāo)記。2D—DIGE的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為 ：從正常對(duì) 照組 N1～N4和 OA實(shí)驗(yàn)組 A1～A4 8個(gè)血清樣本 中各取 25 g蛋 白共 200Ixg進(jìn)行 cy2 熒光標(biāo)記 ，作為 內(nèi)參照(消除膠與膠之間的差異);取 N1、N2、A3、A44個(gè)血清樣本各 50 g蛋 白進(jìn)行 Cy3 熒光標(biāo)記 ;取 A1、A2、N3、N44個(gè)血清樣本各 50 g 蛋 白進(jìn)行 Cy5熒光標(biāo)記 (交叉標(biāo)記 以消除不 同熒光染色效率不 同的誤差 )。50fxgCy2標(biāo)記的內(nèi)參照、 Cy3標(biāo)記 的 N1和 cy5標(biāo)記 的 A1混合后進(jìn)行雙 向電泳分離 ，命名為膠 1;同理 ，內(nèi)參 照、N2和 A2混合后為膠 2，內(nèi)參照、A3和 N3混合后為膠 3，內(nèi)參照 、A4 和 N4混合后為膠 4。
2.3 2D—DIGE雙 向電泳 選擇 pH4～7、24cm 的 IPG膠條對(duì) 血 清樣 品蛋 白質(zhì) 進(jìn)行 第一 向等 電聚焦 (isoelectricfocusing，IEF);IEF參數(shù) 設(shè)置 為 ：30V、6 h;60 V、6 h;200 V、1 h;500 V、2 h;1000 V、2 h; 3 500 V、2.5 h;10 000 V、1 h;10 000 V、8 h;500 V、 12h;78350VHr收膠 。IEF完成后 ，在平衡緩 沖液中平衡膠條 ，將其轉(zhuǎn)移至 12.5% SDS—PAGE膠上進(jìn)行第二向電泳 ，電泳參數(shù)設(shè)置 為 ：第一步蛋 白轉(zhuǎn)移： 2W/gel，電 泳 時(shí) 間 50min;第 二 步 垂 直 電 泳 ：17 W/gel，電泳直至溴酚藍(lán)跑出凝膠下緣 10min(注 ：2D — DIGE凝膠的電泳在避光條件下進(jìn)行)。
2.4 圖像采集與分析 用 Typhoon9400型多功能激光掃描儀凝膠蛋 白圖像 ，使 用 ImageQuant軟件收集凝膠蛋 白圖像 ，使用 DeCyder6.0軟件對(duì)凝膠蛋 白圖譜進(jìn)行分析 ，選取蛋白豐度差異 >1.2倍的蛋 白質(zhì)斑點(diǎn) 、t檢驗(yàn) P<0.05的斑點(diǎn)作進(jìn)一步分析。 2.5 差異蛋 白點(diǎn)質(zhì)譜 圖的獲取及質(zhì)譜數(shù)據(jù) 的分析在 SpotHandlingWorkstation中切取差異蛋白點(diǎn) ，將切取的蛋 白點(diǎn)進(jìn)一步酶解 ，使用 Bruker的 UltraflexIII 質(zhì)譜儀對(duì)酶解樣品進(jìn)行 MALDI—TOF—MS分析，獲得樣 品的肽 質(zhì)量 指紋 圖譜 (peptidemassfigerprinting， PMF)。所獲得圖譜使用 Biotools軟件檢索 ，以 Mascot (http：//www.matrixscience.com)為搜索引擎在數(shù)據(jù)庫Swiss-Pro/Uniprot(http://www.expasy.c/sprol/)中檢索，檢索種屬為human
2.6 Westem bloting分析 取30u血清樣品蛋白，10%聚丙烯酰膠凝膠電泳(SDS-PAGE電泳)后轉(zhuǎn)印至槳偏氣乙烯(PVDF)膜上。用含5%脫脂奶粉的封閉液封閉該膜37 ℃ 1 h，沖洗后加人1抗稀釋液(稀釋度1：2000)4℃孵育過夜后，再加人相應(yīng)的1抗稀釋液37℃孵有1h，經(jīng)ECL顯影后，用電泳凝膠成像分析系統(tǒng)分析灰度值。
3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用軟件SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本1檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果
1 2D-DIGE圖像采集及蛋白表達(dá)
依照2D-DIGE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，依次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)樣品的CyDye熒光染色、第一向IEF電泳、第二向的聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和2D-DIGE凝膠的掃描，得到分別由Cy2.Cy3和Cy5標(biāo)記的不同血清蛋白樣品的蛋白斑點(diǎn)圖和不同熒光疊置所得的膠內(nèi)差異圖像，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行電泳所得的4張2D-DIGE凝膠的熒光疊置圖像，各膠檢測(cè)到的蛋白斑點(diǎn)別為1567、1587，1583和1675，實(shí)驗(yàn)各膠的匹配率達(dá)71%。經(jīng)DeCyder軟件分析兩組間蛋白豐度差異大于1.2倍，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的點(diǎn)共有14個(gè)，其中有9個(gè)蛋白點(diǎn)在0A實(shí)驗(yàn)組表達(dá)上調(diào)，它們?cè)谀z上的編號(hào)為：318，536，546，757、769.773，912916和9175;5個(gè)蛋白點(diǎn)在OA實(shí)驗(yàn)組表達(dá)下調(diào)，它們?cè)谀z上的編號(hào)為：657，974、1196和1221，差異蛋白點(diǎn)在2D-DIGE凝膠上的具體位置，見圖1。
2質(zhì)譜鑒定聯(lián)合數(shù)據(jù)庫匹配分析結(jié)果
進(jìn)行MALDI-TOF-MS鑒定的14個(gè)斑點(diǎn)均獲得了較好的圖譜，這些圖譜以Mascot(hp:/wwww.matrixscience，com)為搜索引擎，聯(lián)合檢索數(shù)據(jù)庫Siss Po/Uniprot(htp://ww.epasy.ch/spro/)初步鑒定出0A實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間蛋白豐度差異大于1.2倍且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的點(diǎn)共8個(gè)，其中有5個(gè)蛋白在OA組表達(dá)上調(diào)，3個(gè)蛋白在OA組表達(dá)下調(diào)，見表1，雙向電泳能根據(jù)分子量和等電點(diǎn)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行二維分離，蛋白質(zhì)經(jīng)過磷酸化、乙酰化、糖基化等修飾后等電點(diǎn)和分子量與原始狀態(tài)相比會(huì)出現(xiàn)偏差，在雙向電泳圖譜上表現(xiàn)為在不同位置出現(xiàn)的蛋白斑點(diǎn)。例如本研究中a2-macroglobulin分別在5個(gè)位置出現(xiàn)，inter-alpha-trypsin inhibitor heay chain 4和 kininogen-1分別在2個(gè)位置出現(xiàn)，但經(jīng)質(zhì)譜鑒定均為同一種蛋白。
3 Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們進(jìn)一步采用臨床樣本進(jìn)行了Western blot-ting驗(yàn)證，結(jié)果表明，OA患者血清中a，M明顯高于正常對(duì)照，見圖2
討論
隨著全球向老齡化社會(huì)的發(fā)展，OA已成為中老年人慢性殘障最常見的原因之一。有研究結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示，在所有導(dǎo)致老年殘障的疾病中，單純的膝骨關(guān)節(jié)炎的致殘率僅次于心血管疾病，處于第2位"，給家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。但對(duì)于骨關(guān)節(jié)炎的預(yù)防、早期診斷及治療目前仍缺乏高效的方法。因此，對(duì)于骨關(guān)節(jié)炎，尤其是對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎等大骨關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)炎的預(yù)防、早期診斷、早期治療及發(fā)病機(jī)制的深入研究具有重大意義，關(guān)于這方面的研究也越來越受到我國(guó)乃至全球醫(yī)療機(jī)構(gòu)和科研機(jī)構(gòu)的重視。目前，關(guān)于0A的研究大多數(shù)以涉及OA病理改變的軟骨、滑膜為中心而展開的，實(shí)驗(yàn)主要針對(duì)這些組織中的一種或幾種因素與0A的關(guān)系，而且是基于某種假定成立的預(yù)期理論進(jìn)行的，這些研究的目的也是為了證實(shí)或者否定這些假定的理論。然而，蛋白質(zhì)組學(xué)這一高通量、高敏感性和高精確度研究方法的出現(xiàn)，打破了傳統(tǒng)研究手段的限制，利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可同時(shí)檢測(cè)不同樣品不同狀態(tài)下成千上萬的蛋白，這一技術(shù)的出現(xiàn)有利于新的蛋白生物學(xué)標(biāo)志物、新藥物治療靶點(diǎn)及新作用機(jī)制的發(fā)現(xiàn)。目前，我國(guó)已有不少研究將蛋白組學(xué)的相關(guān)技術(shù)應(yīng)用于各種疾病診斷及治療的研究中，如梁瓊等[等利用蛋白組學(xué)這一高通量、高敏感性和高精確度研究方法的出現(xiàn)，打破了傳統(tǒng)研究手段的限制，利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可同時(shí)檢測(cè)不同樣品不同狀態(tài)下成千上萬的蛋白，這一技術(shù)的出現(xiàn)有利于新的蛋白生物學(xué)標(biāo)志物、新藥物治療靶點(diǎn)及新作用機(jī)制的發(fā)現(xiàn)。目前，我國(guó)已有不少研究將蛋白組學(xué)的相關(guān)技術(shù)應(yīng)用于各種疾病診斷及治療的研究中，如梁瓊等1等利用蛋白組學(xué)技術(shù)尋找骨肉瘤惡性生物學(xué)行為的分子標(biāo)記物;張曉雪等(3利用蛋白組學(xué)技術(shù)篩選類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清特異性標(biāo)志物;而胡志成等6則利用蛋白組學(xué)技術(shù)尋找病理性瘢痕形成機(jī)制中的特異蛋白為病理性瘢痕形成機(jī)制提供了新的思路。同時(shí)國(guó)內(nèi)外也有不少研究將蛋白組學(xué)技術(shù)應(yīng)用于OA的相關(guān)研究中，但大多數(shù)研究不約而同地選擇了涉及OA病理改變的軟骨、滑膜、關(guān)節(jié)液作為研究對(duì)象，多數(shù)理論也認(rèn)為OA是關(guān)節(jié)軟骨的局部病變。但是，目前仍沒有任何一種關(guān)于0A的發(fā)病機(jī)制的假設(shè)理論經(jīng)研究證實(shí)是一定成立的。因此，本研究突破以往研究思路的限制，選擇血清蛋白作為研究對(duì)象，期望能通過對(duì)OA血清蛋白質(zhì)組學(xué)的比較分析，為OA發(fā)病機(jī)制的研究提供新的思路和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，尋找新的0A疾病相關(guān)蛋白，篩選出能用于OA診斷、治療或發(fā)病機(jī)制研究的血清生物學(xué)標(biāo)記物。
本研究采用2D-DIGE聯(lián)合MALDI-TOF-MS的比較蛋白組學(xué)研究方法，成功建立了0A患者血清雙向熒光膠內(nèi)差異凝膠電泳技術(shù)體系，獲得了分離效果良好、清晰的蛋白斑點(diǎn)圖譜，每張膠均檢測(cè)到數(shù)以干計(jì)的蛋白點(diǎn)，且膠與膠之間的蛋白斑點(diǎn)匹配率較高，通過Decyder軟件找到了0A患者血清中8個(gè)具有顯著差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)，成功建立了0A血清差異蛋白組學(xué)的研究方法，為尋找OA血清生物標(biāo)記物和OA疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
經(jīng)生物信息學(xué)檢索顯示，本研究所鑒定的在0A患者血清中差異表達(dá)的8個(gè)蛋白均直接或間接地參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、自身免疫反應(yīng)，提示骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡及自身免疫反應(yīng)有著密切的關(guān)系。而通過對(duì)其它應(yīng)用蛋白組學(xué)進(jìn)行的OA相關(guān)研究的文獻(xiàn)與本研究比較發(fā)現(xiàn)，a，M極有可能為0A的早期診斷提供新的生物學(xué)標(biāo)記物，為OA的早期治療提供新的藥物治療靶點(diǎn)，同時(shí)也為OA發(fā)病機(jī)制的研究提供了新的線索，然而其具體應(yīng)用價(jià)值尚需大量的后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究工作。
a，M是由肝臟內(nèi)皮細(xì)胞分泌的廣譜蛋白酶抑制劑，主要存在于血漿中，參與機(jī)體的免疫反應(yīng)過程-1，為IL-1/LL-8TNF等炎癥因子提供結(jié)合位點(diǎn)，有研究表明其與阿爾茨海默病的發(fā)病有關(guān)19-11。
雖然骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，但大多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生主要是由軟骨細(xì)胞外基質(zhì)膠原和聚集蛋白聚糖的丟失引起的"1。軟骨聚集蛋白是由ADAMTS-4/5，ADAMTS-7/12等聚集蛋白聚糖酶降解，ADAMTS-4/5的抑制劑對(duì)軟骨蛋白聚糖的分解和代謝起調(diào)節(jié)作用，任何情況的抑制阻斷將會(huì)加速軟骨聚集蛋白聚糖的降解，之前TMP一 3是 唯一一個(gè)被發(fā)現(xiàn) 的 ADAMTS一4/5內(nèi)源性 抑制劑 ，目前研究發(fā)現(xiàn) otM是另一個(gè)抑制劑u 。另有研究證明，僅2M是一個(gè)新 發(fā)現(xiàn) ADAMTS一7/12的底物 ，兩者結(jié)合可抑制 ADAMTS一7/12對(duì) COMP的降解 ，同時(shí) M也是一種重要 的基質(zhì)金屬蛋 白酶(m8. trixmetalloproteinases，MMPs)清除劑 ，參 與 OA的病理過程_l。張洪等¨ 通過 比較兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨與正常兔膝軟骨 ，發(fā)現(xiàn)軟骨細(xì)胞 中 ：M 的表達(dá)在兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型組陽性率均高于對(duì)照組 ，同時(shí)實(shí) 驗(yàn)組軟骨細(xì)胞凋亡的程度與 ot：M 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān) ，表明 僅M 與 骨關(guān) 節(jié) 發(fā) 生 發(fā) 展 有 密切 關(guān) 系。林 子 洪等-1通過對(duì)創(chuàng)傷性兔膝骨關(guān) 節(jié)炎模型采用 僅：M關(guān)節(jié) 內(nèi)注射與陰性對(duì)照 比較 ，發(fā)現(xiàn) otM 治療組的半 月板退變速度稍慢 ，半月板纖 維和細(xì)胞情況較好 ，其對(duì)關(guān)節(jié)炎癥有直接 的抑制作用 ，但對(duì)滑膜炎癥 的抑制作用較弱 ，提示 M可能適 合 OA發(fā)病初期 的保 護(hù)性治療和研究 。而李蔚勃等 通過文獻(xiàn)研究分析總結(jié) M對(duì)骨關(guān)節(jié)炎的影響可能是通過抑制 MMP參與 自由基的清除 ，通過轉(zhuǎn)運(yùn) 細(xì)胞 因子調(diào)節(jié) MMP1的合成與代謝參與免疫過程 ，但其具體機(jī)制 尚待進(jìn) 一步研究。
本實(shí)驗(yàn) OA組血清 ot：M的升高，可能是由于 OA 機(jī)體 自身對(duì)抗疾病的一個(gè)保護(hù)性機(jī)制導(dǎo)致其分泌增多 ，而其是否與關(guān)節(jié)軟骨局部的表達(dá)水平一致 ，以及與 OA發(fā)病機(jī)制的具體關(guān)系尚待進(jìn)一步研究 。
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