發(fā)布時(shí)間：2020-02-27所屬分類：農(nóng)業(yè)論文瀏覽：1次
摘 要： [摘要]目的：建立黃柏藥材中總生物堿的含量測(cè)定方法。方法：采用酸性染料比色法，通過(guò)對(duì)pH值，顯色劑用量，測(cè)定波長(zhǎng)等實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行篩選，尋求最佳測(cè)定條件。結(jié)果：在pH=5.2，0.03%酸性染料3mL，測(cè)定波長(zhǎng)為415nm時(shí)，能準(zhǔn)確測(cè)定黃柏藥材中總生物堿的含量，其精
[摘要]目的：建立黃柏藥材中總生物堿的含量測(cè)定方法。方法：采用酸性染料比色法，通過(guò)對(duì)pH值，顯色劑用量，測(cè)定波長(zhǎng)等實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行篩選，尋求最佳測(cè)定條件。結(jié)果：在pH=5.2，0.03%酸性染料3mL，測(cè)定波長(zhǎng)為415nm時(shí)，能準(zhǔn)確測(cè)定黃柏藥材中總生物堿的含量，其精密度、線性、重復(fù)性、回收率等均良好。結(jié)論：本含量測(cè)定方法操作方便，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確性好，可以用于黃柏總生物堿的含量的測(cè)定。
[關(guān)鍵詞]黃柏;生物堿;鹽酸小檗堿;酸性染料比色法
1前言
黃柏為黃皮樹(shù)(蕓香科植物)的干燥樹(shù)皮，其具有瀉火除蒸，除骨蒸清虛熱，解毒療瘡的藥理作用[1]，黃柏藥材含有多種生物堿，其中包括小檗堿、黃柏堿、木蘭花堿、藥根堿等多種生物堿[2]，中華人民共和國(guó)藥典只對(duì)小檗堿和黃柏堿進(jìn)行了含量要求。本文采用酸性染料比色法對(duì)其總生物堿含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性較好。
2儀器與試劑
2.1儀器
紫外分光光度儀(WARIANCary50)，電子分析天平(奧豪斯AX224ZH/E)，超聲波清洗器(型號(hào)SK8210LHC上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)，高效液相色譜儀(FL2200福立儀器)。
2.2試藥
黃柏(購(gòu)于湖南、四川、江西等省)，鹽酸小檗堿(含量>98%，四川玉鑫藥業(yè)有限公司)，溴麝香草酚藍(lán)(天津永大化學(xué)試劑有限公司)，枸櫞酸、磷酸氫二鈉、甲醇、醋酸、氯仿等均為分析純。
3方法與結(jié)果
3.1試劑的制備
3.1.1對(duì)照品的制備精密稱取鹽酸小檗堿6.90mg，置50mL的量瓶中，加pH=5.2枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液溶解至刻度，搖勻，即得(138.9μg/mL)。
3.1.2供試品的制備[3]
取黃柏粗粉約5g，精密稱定。加100mL醋酸-甲醇(1∶100)，50℃超聲30min，濾過(guò)，濾渣同法再超聲提取一次。合并濾液，至250mL量瓶中，加醋酸甲醇(1∶100)至刻度，搖勻，精密量取上述溶液4.0mL，置25mL量瓶中，加醋酸甲醇(1∶100)至刻度，搖勻，得供試品溶液。
3.1.3枸櫞酸-磷酸二氫鈉緩沖液的配制
pH為4.4，4.8，5.2，5.6，6.0緩沖溶液每100mL的配比如表1：
3.1.4酸性染料的配制
精密稱取溴麝香草酚藍(lán)0.05058g，溶于pH=5.2枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液中并定容至100mL。
3.2酸性染料比色法條件的選擇
3.2.1緩沖溶液pH的確定
精密量取3.1.1對(duì)照品溶液1mL共5份，各分別加入pH=4.4，4.8，5.2，5.6，6.0的枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液8mL，再加入pH=4.4，4.8，5.2，5.6，6.0的溴麝香草酚藍(lán)溶液3mL、氯仿4mL，振搖，靜止30min后分出下層，再加入氯仿4mL同法萃取2次，合并氯仿萃取液，氯仿定容至25mL，加入0.5g無(wú)水硫酸鈉脫水。在波長(zhǎng)415nm處測(cè)定其吸光度[5]。實(shí)驗(yàn)表明對(duì)照品在pH=5.2時(shí)有最大吸收，結(jié)果見(jiàn)圖1，故實(shí)驗(yàn)中選用pH=5.2緩沖液。
3.2.2酸性染料用量的選擇
取乙醇配制的濃度為142μg/mL的鹽酸小檗堿對(duì)照品1mL共6份，水浴揮干甲醇，分別加入pH=5.2緩沖液配制的溴麝香草酚藍(lán)溶液1.5，2，2.5，3，3.5，4mL、同3.2.1中的萃取方法及測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明當(dāng)溴麝香草酚藍(lán)溶液加入量大于3.0mL時(shí)，吸收趨于穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)圖2，所以溴麝香草酚藍(lán)溶液的加入量為3mL。
3.2.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇
分別精密吸取3.1.1鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1mL和3.1.2供試品溶液1mL，各加pH=5.2緩沖液8.0mL、溴麝香草酚藍(lán)溶液3.0mL、氯仿4mL，振搖，靜置30min后分出下層，反復(fù)萃取3次，合并氯仿萃取液，移入25mL量瓶中加氯仿至刻度，加入0.5g無(wú)水硫酸鈉脫水[6]，在波長(zhǎng)200~800nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液和供試品溶液在波長(zhǎng)415nm處均有穩(wěn)定的最大吸收，結(jié)果如圖3所示，故選擇415nm為測(cè)定波長(zhǎng)。
3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線
分別精密量取對(duì)照品濃度55.2μg/mL、82.8μg/mL、110.4μg/mL、138.0μg/mL、165.6μg/mL的對(duì)照品1.0mL，按照3.2.3方法在波長(zhǎng)415nm處測(cè)定其吸光度，可得回歸方程y=0.0023x+0.0604，R2=0.9996，表明鹽酸小檗堿濃度在40~200μg/mL之間有良好的線性關(guān)系。
3.4精密度實(shí)驗(yàn)
取3.1.1對(duì)照品溶液，按照3.2.3方法操作得到萃取液，搖勻，連續(xù)5次在波長(zhǎng)415nm處測(cè)定其吸收，結(jié)果如表2。由表2可知，RSD為0.71%，n=5。儀器精密度良好。
3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取3.1.2供試品溶液1.0mL，按照3.2.3方法操作得到萃取液，搖勻，在不同時(shí)間間隔里在波長(zhǎng)415nm處測(cè)定其吸收，結(jié)果RSD為0.99%，n=5。表明供試品溶液在5小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。
3.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
分別精密量取1.0mL的3.1.2供試品溶液共5份，編號(hào)為1、2、3、4、5，分別按照3.2.3方法操作得到萃取液，分別在波長(zhǎng)415nm處測(cè)定其吸收，結(jié)果RSD為1.09%(n=5)。表明供試品溶液重復(fù)性良好。
3.7回收率實(shí)驗(yàn)
精密稱量藥材5份粗粉約5.0g，加100mL醋酸甲醇(1∶100)，50℃超聲處理30min，抽濾得濾液及殘?jiān)Ｓ眠m量醋酸甲醇(1∶100)沖洗殘?jiān)蜑V紙，二次超聲提取殘?jiān)?00mL醋酸甲醇(1∶100)，50℃超聲處理30min，抽濾得濾液，與一次濾液合并，移入250mL容量瓶中加醋酸甲醇(1∶100)至刻度，得到黃柏提取液。精密吸取提取液2.0mL和1.72mg/mL的對(duì)照品溶液1mL混合，移入25mL容量瓶中加醋酸甲醇(1∶100)定容至刻度，得分別在波長(zhǎng)415nm處測(cè)定其吸收，計(jì)算回收率，結(jié)果如下表2。由表2可知，樣品的回收率平均達(dá)到96.9%，RSD為2.18%，n=5。
3.8樣品的測(cè)定
所購(gòu)樣品按3.1.2供試品制備方法進(jìn)行制備，按照3.2.3方法操作得到萃取液，在波長(zhǎng)415nm處測(cè)定其吸光度，結(jié)果所購(gòu)三個(gè)樣品含量依次為4.83%，5.29%，5.16%。
4結(jié)論與討論
(1)酸性染料比色法測(cè)定黃柏中總生物堿的含量的測(cè)定方法，精密度實(shí)驗(yàn)RSD為0.71%(n=5)，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD為0.99%(n=5)。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD為1.09%(n=5)，回收率96.9%(n=5)。此操作方便，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確性好，可以用于黃柏總生物堿的含量的測(cè)定。
(2)按照中國(guó)藥典的方法對(duì)三批藥材中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測(cè)定，得樣品中鹽酸小檗堿的含量依次為3.68%，4.18%，4.02%。分別占有總生物堿的76.2%，79.0%，77.9%。由此可見(jiàn)，雖然黃柏中還有其他的生物堿，比如黃柏堿、藥根堿、蝙蝠葛任堿、木蘭花堿等，但均以鹽酸小檗堿為主，并且含量占比相對(duì)穩(wěn)定。
(3)采用柱色譜法對(duì)三批藥材也進(jìn)行了總生物堿的含量測(cè)定[7]，得到樣品中總生物堿的含量依次為4.32%、4.82%、4.66%，均低于酸性染料比色法。主要可能是此法只對(duì)季銨型總生物堿進(jìn)行了測(cè)定，而酸性染料比色法能對(duì)多種生物堿都能進(jìn)行測(cè)定。
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